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文檔簡介
1、目的: ⑴探索妊娠小鼠機(jī)體與新生小鼠機(jī)體的抗肝癌(H22)效應(yīng); ⑵探討小鼠胚胎提取物對(duì)H22細(xì)胞增殖分化和凋亡的影響; ⑶探索治療肝癌的新的聯(lián)合用藥方案。 方法: ⑴妊娠小鼠抗癌效應(yīng)實(shí)驗(yàn):妊娠昆明種小鼠15只為實(shí)驗(yàn)組,無孕昆明種雌性小鼠15只為對(duì)照組,分別于腹膜腔內(nèi)接種約1×105個(gè)小鼠肝癌細(xì)胞,觀測指標(biāo):①腫瘤生長情況;②接種癌細(xì)胞后的小鼠生存期。 ⑵新生小鼠抗癌效應(yīng)實(shí)驗(yàn):昆明種新生小
2、鼠(出生24小時(shí)內(nèi))10只為實(shí)驗(yàn)組,無孕成年雌性昆明種小鼠10只為對(duì)照組,分別于腹膜腔內(nèi)接種約750個(gè)小鼠肝癌細(xì)胞,觀測指標(biāo):①腫瘤生長情況;②接種癌細(xì)胞后的小鼠生存期。 ⑶細(xì)胞實(shí)驗(yàn),分別用小鼠胚胎提取物(E)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、全反式維甲酸(ATRA)處理H22癌細(xì)胞,使用細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT比色法檢測不同時(shí)間點(diǎn)H22癌細(xì)胞的增殖情況;使用姬姆薩染色觀察處理前后H22癌細(xì)胞的形態(tài)變化情況;使用堿性磷酸酶(ALP)和γ-L-
3、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)試劑盒檢測處理后的H22癌細(xì)胞ALP和γ-GT的活性以探討H22肝癌細(xì)胞的分化程度;采用流式細(xì)胞分析儀分析處理后的H22癌細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果: ⑴妊娠動(dòng)物抗癌效應(yīng)實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)觀察60天,15只實(shí)驗(yàn)組小鼠中有5只無腫瘤生長;另10只腫瘤生長緩慢, 接種癌細(xì)胞后的平均生存期為36.3±1.95天。無孕雌性小鼠腫瘤生長迅速,接種癌細(xì)胞后的平均生存期為20.67±2.35天。 ⑵新生小鼠抗癌效應(yīng)實(shí)
4、驗(yàn):新生小鼠腫瘤生長緩慢,平均生存期34.9±1.45天。成年小鼠腫瘤生長迅速,接種癌細(xì)胞后的平均生存期24.8±2.30天。 ⑶細(xì)胞實(shí)驗(yàn),①細(xì)胞形態(tài)變化:對(duì)照組細(xì)胞大小不一,細(xì)胞核大,核漿比例大;2.5%胚胎提取物(E)處理后,細(xì)胞大小比較均一,核漿比例變小,可見部分凋亡細(xì)胞。②胚胎提取物(E)對(duì)H22細(xì)胞增殖分化和凋亡的影響:MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示胚胎提取物能有效抑制H22細(xì)胞的分裂,且呈一定的時(shí)間和藥物濃度依賴性;與對(duì)照組比較
5、,胚胎提取物(E)處理H22細(xì)胞120小時(shí)后,γ-GT比活性降低,ALP比活性升高,提示H22細(xì)胞向成熟分化;流式細(xì)胞儀凋亡率檢測,2.5%胚胎提取物物能誘導(dǎo)H22細(xì)胞凋亡,與對(duì)照組比較,差異有非常顯著性意義;③5-FU+ATRA+胚胎提取物(E)抑制H22細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)H22細(xì)胞分化和促進(jìn)H22細(xì)胞凋亡效果最好:細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示5-FU+ATRA+胚胎提取物(E)合用組細(xì)胞數(shù)比其他組少,γ-GT比活性較其他組低,ALP比活性較其他組高
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