1、目的:丁苯酞具有改善局部腦缺血區(qū)微循環(huán)和血流量,保護(hù)線(xiàn)粒體的結(jié)構(gòu)和功能,縮小腦梗塞面積,減輕腦水腫等作用。在臨床上,丁苯酞廣泛用于治療缺血性腦血管病,并作為腦血管病后改善智能和功能恢復(fù)的首選用藥。從發(fā)病機(jī)制上看,腦血管病的發(fā)生與脂類(lèi)代謝密切相關(guān),其中甘油三酯代謝異常是腦血管病發(fā)生的重要因素之一。目前國(guó)內(nèi)對(duì)丁苯酞與甘油三酯代謝的研究尚少見(jiàn)報(bào)道。有必要進(jìn)一步研究丁苯酞對(duì)甘油三酯代謝的影響,以期在日后應(yīng)用丁苯酞治療腦缺血性疾病中,指導(dǎo)臨床合理

2、用藥。
　　 基因芯片(Gene chip)又稱(chēng)DNA芯片(DNA chip),是一種新型的基因功能分析技術(shù),具有高通量、微型化和自動(dòng)化的特點(diǎn),成為后基因組時(shí)代基因功能分析的最重要技術(shù)之一?；蛐酒幕驹硎菈A基互補(bǔ)配對(duì)和分子雜交,是指將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段有規(guī)律地排列固定于支持物上,然后與待測(cè)的標(biāo)記樣本基因按堿基配對(duì)原理進(jìn)行雜交,再通過(guò)激光共聚焦熒光顯微鏡檢測(cè)系統(tǒng)等對(duì)芯片進(jìn)行掃描,并配以計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)熒光信號(hào)做出比

3、較和檢測(cè),從而迅速得出所要的信息?；蛐酒夹g(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于無(wú)需先前知道測(cè)試樣品中靶基因的作用情況,可同時(shí)觀察成千上萬(wàn)個(gè)基因表達(dá)的結(jié)果,高效、快速、多參量地對(duì)基因進(jìn)行檢測(cè),從整體基因表達(dá)譜水平研究疾病。本研究對(duì)利用基因芯片技術(shù)獲得的不同劑量丁苯酞作用下,在不同用藥時(shí)間點(diǎn)大鼠肝臟基因數(shù)據(jù)的觀察,篩選出有意義基因,對(duì)其表達(dá)變化情況進(jìn)行深入分析,從分子生物學(xué)水平掌握丁苯酞對(duì)甘油三酯代謝的影響,為臨床合理用藥提供幫助。
　　 方法:1數(shù)據(jù)取

4、得情況實(shí)驗(yàn)大鼠12組,用不同劑量的丁苯酞灌胃3天、10天、20天、灌胃10天停藥10天?；蛐酒峙?一倍劑量組4片;兩倍劑量組4片;四倍劑量組4片。對(duì)雜交后的基因芯片通過(guò)共聚焦顯微鏡掃描取得掃描數(shù)據(jù)。
　　 2整理數(shù)據(jù)將已取得的不同劑量、不同時(shí)間點(diǎn)丁苯酞喂養(yǎng)大鼠后獲得的12個(gè)rat_384基因芯片檢測(cè)數(shù)據(jù)Excell文件進(jìn)行整理。
　　 3篩選甘油三酯代謝相關(guān)基因找出甘油三酯代謝相關(guān)基因得出比值,并匯總為一個(gè)甘油三酯代

5、謝相關(guān)基因比值Excell文件。
　　 4找出甘油三酯代謝中有意義基因從甘油三酯代謝相關(guān)基因比值Excell文件中找出影響甘油三酯代謝的關(guān)鍵基因。
　　 結(jié)果:丁苯酞喂養(yǎng)大鼠后用大鼠rat_384基因芯片檢測(cè),獲得4096個(gè)基因和表達(dá)序列,從中找出影響甘油三酯代謝的關(guān)鍵基因5個(gè)AF021348(線(xiàn)粒體甘油-3-磷酸脂酰轉(zhuǎn)移酶)、NM_012597(肝脂肪酶)、NM_017075(乙酰輔酶A乙酰轉(zhuǎn)移酶1)、BC087036

6、(極長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A脫氫酶)、NM_001004085(肉堿乙酰轉(zhuǎn)移酶),具體分析這幾個(gè)基因隨用藥劑量及用藥時(shí)間發(fā)生上調(diào)或下調(diào)而引起其表達(dá)變化的情況。
　　 1一倍劑量(60mg/kg/day)用藥3天有意義基因表達(dá)變化情況AF021348、NM_012597、BC087036、NM_001004085比值在正常范圍。NM_017075受到影響,上調(diào)超出正常范圍。
　　 2一倍劑量(60mg/kg/day)用藥10天有意義

7、基因表達(dá)變化情況AF021348、NM_012597、NM_017075、BC087036、NM_001004085這5個(gè)基因比值皆在正常范圍。其中,NM_017075在此用藥狀態(tài)下,下調(diào)到正常范圍。
　　 3一倍劑量(60mg/kg/day)用藥20天有意義基因表達(dá)變化情況NM_012597、NM_017075、BC087036、NM_001004085與此藥物劑量下用藥10天的情況相似,基因變化在正常范圍。而此時(shí)AF0213

8、48呈明顯上調(diào)趨勢(shì)。
　　 4一倍劑量(60mg/kg/day)用藥10天停藥10天有意義基因表達(dá)變化情況AF021348比值進(jìn)一步增高,基因上調(diào)更加明顯。NM_012597比值超過(guò)正常范圍,基因呈上調(diào)表觀。BC087036在此用藥狀態(tài)下首次發(fā)生變化,下調(diào)到正常范圍之下。NM_001004085、NM_017075比值仍在正常范圍,未再出現(xiàn)有意義變化。
　　 5兩倍劑量(120mg/kg/day)用藥3天有意義基因表達(dá)變

9、化情況AF021348、NM_017075比值超過(guò)正常范圍,基因呈上調(diào)變化。NM_012597、BC087036、NM_001004085比值在正常范圍。
　　 6兩倍劑量(120mg/kg/day)用藥10天有意義基因表達(dá)變化情況NM_017075比值仍在正常范圍之上,但上調(diào)幅度較兩倍劑量用藥3天有所下降,與一倍劑量用藥10天比較其處于上調(diào)變化。其余四個(gè)基因AF021348、NM_012597、BC087036、NM_0010

10、04085比值皆在正常范圍。
　　 7兩倍劑量(120mg/kg/day)用藥20天有意義基因表達(dá)變化情況所有五個(gè)基因AF021348、NM_012597、NM_017075、BC087036、NM_001004085比值皆在正常范圍,無(wú)上調(diào)、下調(diào)變化。
　　 8兩倍劑量(120mg/kg/day)用藥10天停藥10天有意義基因表達(dá)變化情況所有五個(gè)基因AF021348、NM_012597、NM_017075、BC0870

11、36、NM_001004085繼續(xù)保持穩(wěn)定,無(wú)上調(diào)、下調(diào)變化。
　　 9四倍劑量(240mg/kg/day)用藥3天有意義基因表達(dá)變化情況NM_012597比值明顯降低,基因下調(diào)明顯,是該基因所有觀察組中首次下調(diào)且下調(diào)幅度較大。NM_017075比值明顯升高,基因上調(diào)明顯。其余三個(gè)基因AF021348、BC087036、NM_001004085比值在正常范圍,無(wú)上調(diào)、下調(diào)變化。
　　 10四倍劑量(2400mg/kg/d

12、ay)用藥10天有意義基因表達(dá)變化情況NM_017075比值仍在正常范圍之上,基因繼續(xù)保持上調(diào)變化,但上調(diào)幅度較四倍劑量用藥3天時(shí)降低。其余四個(gè)基因AF021348、NM_012597、BC087036、NM_001004085比值在正常范圍,無(wú)上調(diào)、下調(diào)變化。
　　 11四倍劑量(240mg/kg/day)用藥20天有意義基因表達(dá)變化情況所有觀察的五個(gè)基因AF021348、NM_012597、NM_017075、BC08703

13、6、NM_001004085在此用藥劑量和時(shí)間點(diǎn),比值在正常范圍,無(wú)基因上調(diào)、下調(diào)變化。
　　 12四倍劑量(240mg/kg/day)用藥10天停藥10天有意義基因表達(dá)變化情況所有觀察的五個(gè)基因AF021348、NM_012597、NM_017075、BC087036、NM_001004085比值仍在正常范圍,基因表達(dá)穩(wěn)定。
　　 結(jié)論:大鼠口服丁苯酞后,通過(guò)rat384芯片可以觀察到肝臟在不同用藥劑量、不同用藥時(shí)間點(diǎn)

14、眾多基因上調(diào)或下調(diào)的變化。從中研究與甘油三酯代謝相關(guān)的有意義基因5個(gè),得出其在不同劑量、多個(gè)時(shí)間點(diǎn)變化表達(dá)對(duì)甘油三酯代謝的影響和在各個(gè)用藥階段某些藥物、疾病、機(jī)體功能狀態(tài)等對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)物的影響。
　　 丁苯酞一倍劑量應(yīng)用早期,NM_017075基因上調(diào)而其余四個(gè)基因保持穩(wěn)定,肝臟生酮作用和肝外解酮作用增強(qiáng),有利于降低甘油三酯。后期AF021348、NM_012597基因上調(diào),甘油三酯生成和降解相互作用;且伴有:BC087036基