1、豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)是一種對豬群具有強感染性的病毒,可引起豬群出現(xiàn)水樣腹瀉、嘔吐、厭食消瘦的癥狀,尤其對初生仔豬的發(fā)病率和致死率可高達90-100％。該病毒引起的豬流行性腹瀉病(PED)自1971年首次爆發(fā)以來,先后在比利時、捷克、中國、韓國、越南及美國等國家爆發(fā),2010年10月以后,由新的流行株所引起的PEDV開始在我國爆發(fā),給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了重大經(jīng)濟損失。

2、>　　本研究通過對病毒增殖規(guī)律及其感染引起細胞周期阻滯的研究,分析PEDV的致病原因,以期為該病致病機理及疾病的防控提供理論支持。首先我們以本實驗室PEDV分離株HLJ/2011的N基因為模板,設(shè)計一對特異性引物和探針,經(jīng)過對一系列反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立了Taq Man-MGB熒光定量PCR方法,該方法特異性較強,其敏感性可達0.1TCID50/0.1ml,可以作為豬流行性腹病毒感染診斷的特異性檢測方法,同時該方法又具有定量的特性,為下一

3、步測定病毒感染細胞后的增殖規(guī)律提供技術(shù)支持。其后,我們利用CPE觀察及IFA技術(shù)測定了PEDV在感染細胞后的增殖動態(tài),證實PEDV分離株HLJ/2011感染VERO細胞后12-24h中病毒生長曲線的斜率最大,表明此階段病毒增殖速率最快;同時我們利用流式細胞技術(shù)及Western Blot技術(shù)等確定PEDV增殖對VERO細胞周期的影響,結(jié)果表明PEDV感染后能夠引起VERO細胞在G1/G0期產(chǎn)生阻滯。為了進一步解析PEDV所引起的細胞周期阻

4、滯現(xiàn)象與細胞DNA損傷信號通路的相關(guān)性,我們針對DNA損傷信號通路中的上游及下游中的關(guān)鍵分子 Ch2.k與H2A.X,利用Western Blot等方法檢測其在PEDV感染后磷酸化水平的變化,結(jié)果表明,Ch2.k、H2A.X的磷酸化水平隨病毒感染時間延長而增加;反之,在加入ATM和Ch2.k分子的化學(xué)阻斷劑處理后,細胞周期未見明顯的阻滯現(xiàn)象,而且PEDV的增殖也受到了抑制,表明PEDV感染所引起的細胞周期阻滯現(xiàn)象,是由于DNA損傷信號通