1、目的:對(duì)幾種不同陽離子材料制備的陽離子脂質(zhì)體(CLs)進(jìn)行制劑學(xué)評(píng)價(jià),并考察了其細(xì)胞安全性以及其對(duì)反義寡核苷酸SIP30的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)效果,以期篩選出安全性好、轉(zhuǎn)運(yùn)效率高的CLs,為后續(xù)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:本研究中,分別以三甲基十六烷基溴化銨(CTAB)、聚乙烯亞胺(PEI)、1,2環(huán)氧烷基胺衍生物(EAADs)為陽離子材料制備了幾種不同的CLs。通過靜電相互作用使SIP30負(fù)載于CLs上,HPLC法測(cè)定其包封率與載藥量。

2、采用激光粒度分析儀和透射電鏡對(duì)CLs進(jìn)行了粒徑及電位的測(cè)定以及外觀形態(tài)的表征。通過瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)考察了各CLs保護(hù)SIP30的抗DNase穩(wěn)定性作用。MTT法對(duì)各CLs的細(xì)胞安全性進(jìn)行了評(píng)價(jià),并以Lipofectamine2000為對(duì)照,通過流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡及共聚焦顯微鏡考察了細(xì)胞對(duì)負(fù)載FAM-SIP30的CLs的攝取。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)中制備了5種陽離子脂質(zhì)體CCLs、PCLs(1800)、PCLs(25K)、ECLs-

3、2和ECLs-3。在優(yōu)化的處方條件下,所測(cè)得的粒徑分別為88.4±1.00、150.20±7.09、171.33±19.65、165.8±10.5、118.0±1.9nm,電位分別為30.4±4.81、12.38±0.87、11.93±3.14、4.14±0.67、2.79±0.66mV;與SIP30共孵育后,能夠?qū)IP30基本全部負(fù)載的N/P分別為4.2、3、3、10、20,且DNase穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中,均對(duì)SIP30有一定的保護(hù)作用。

4、流式細(xì)胞儀分析及熒光顯微鏡觀察表明,PCLs(25K)和ECLs-3有較好的轉(zhuǎn)運(yùn)SIP30的能力,其陽性細(xì)胞率分別為95.33％和86.58%,平均熒光強(qiáng)度分別為4.56和18.57,其他各組均未被攝取。共聚焦結(jié)果表明細(xì)胞攝取的FAM-SIP30/PCLs(25K)主要定位于核的周圍,而FAM-SIP30/ECLs-3則離核較遠(yuǎn)。攝取機(jī)制結(jié)果表明,細(xì)胞攝取PCLs(25K)和ECLs-3是一個(gè)消耗能量的過程,網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用是細(xì)胞