1、廣州醫(yī)學院碩士學位論文共表達人NK4、B71復制缺陷型重組腺病毒的制備及體外功能鑒定姓名：石慧申請學位級別：碩士專業(yè)：影像醫(yī)學與核醫(yī)學指導教師：陳德基20070525廣州醫(yī)學院碩士學位論文共表達人NK4，B71復制缺陷型霞組腺病毒的制備及體外功能鑒定共表達人NK4、B7一l復制缺陷型重組腺病毒的制備及體外功能鑒定中文摘要研究背景原發(fā)性肝癌的基因治療是近年來的研究熱點，但目前基因治療臨床療效遠不如動物實驗和體外實驗結果。造成這一區(qū)別的主要

2、原因在于腫瘤是一個多因素、多環(huán)節(jié)、多階段的復雜疾病，單一因素的糾正往往不能達到理想的抑制腫瘤效應。旨在抑制腫瘤血管及增強機體腫瘤免疫的兩種單一療法的聯合是增強基因治療效果的新策略。B71作為共刺激因子對誘導產生腫瘤特異性CTL具有十分重要的作用。NK4是肝細胞生長因子(HGF)的拮抗劑及強有力的腫瘤血管生成抑制劑。本研究擬將NK4基因及B71基因亞克隆至同一腺病毒載體，使之在誘導腫瘤細胞凋亡的同時激活產生更強的CTLs，從而發(fā)揮協同抗腫

3、瘤效應，并為下一步利用該載體進行肝癌的復合基因治療奠定基礎。方法1、雙酶切pcDNA3／hNK4質粒獲得NK4基因編碼區(qū)序列及設計雙引物PCR擴增獲得B71基因編碼區(qū)序列及CMVPA片斷后，通過亞克隆技術構建重組穿梭載體pAdTrack刪V／B7l倆vPA／NK4。雙酶切法及DNA測序鑒定重組載體的正確性。2、利用基因重組技術構建含NK4及B71雙基因的重組腺病毒質粒載體pAd—B7一1NK4。酶切法將pAdB7INK4線性化，脂質體介