1、該文工作以胃癌細胞BGC-823為材料,運用分子細胞生物學手段,研究TPA/ATRA對胃癌細胞MAPK信號轉導途徑中一些激酶的調節(jié)作用,以及對細胞周期調控因子的調節(jié)作用.為進一步了解胃癌發(fā)生及發(fā)展的可能機制提供理論依據(jù).首先,用MTT法檢測TPA/RA對BGC-823細胞生長的作用,發(fā)現(xiàn)TPA和ATRA均有效地抑制BGC-823細胞生長,且具有濃度依賴性,說明TPA/ATRA在BGC-823的生長抑制中存在著協(xié)同作用.進一步檢測TPA/

2、ATRA對細胞周期分布的影響,發(fā)現(xiàn)大量細胞滯留在G0/G1期,共同處理時,阻斷效應也相應增強,表明TPA/ATRA對胃癌細胞生長的抑制作用與細胞滯留在G0/G1期有關.為此,采用western blot法檢測TPA/ATRA對一些重要的G1/S期調控蛋白表達水平的影響.結果表明:cyclinD1與CDK2穩(wěn)定表達,不被調控;TPA/ATRA處理時,cyclinE和磷酸化的RB蛋白水平呈下調趨勢,共同作用時,基本抑制CyclinE的表達,

3、但對pRb抑制的協(xié)同作用不明顯;TPA以時間依賴方式上調P21waf1和P53的蛋白表達,與ATRA共同處理時,上調趨勢增強.表明TPA/ATRA可以通過調節(jié)細胞周期調控分子的蛋白表達水平,抑制cyclin-CDK激酶活性,使Rb蛋白去磷酸化,誘導細胞滯留在G0/G1期,從而抑制細胞的生長.其次,我們前期研究結果發(fā)現(xiàn),BGC-823細胞經TPA處理后發(fā)生凋亡,呈現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)變化.該文進一步檢測JNK蛋白表達,TPA處理后,JNK水平

4、迅速上升,3h時達到最高峰,其后略有下降,但蛋白表達水平始終高于對于對照組.檢測c-jun mRNA的表達,觀察到類似的現(xiàn)象.瞬時轉染和CAT assay檢測,觀察到TPA以劑量依賴的方式上調AP-1蛋白的轉錄活性.用PKC抑制劑wortamanin預處理細胞后,TPA誘導的JNK的蛋白表達量低于TPA單獨處理組,細胞凋亡數(shù)量也同樣遠遠低于TPA單獨處理組,說明TPA通過PKC途徑激活JNK.以上結果不僅證實TPA誘導的凋亡與通過PKC

5、途徑激活的JNK相關,而且顯示BGC-823細胞中JNK途徑對于TPA誘導的細胞凋亡是必需的.綜上所述,該論文工作表明,TPA一方面激活JNK途徑,誘導轉錄因子AP-1的轉錄活性,啟動一系列凋亡相關基因的表達,誘導細胞發(fā)生凋亡;另一方面通過ERK途徑將生長抑制信號傳遞至細胞中,通過調控細胞周期相關因子的表達,使Rb蛋白去磷酸化而導致細胞滯留在G0/G1期,從而抑制胃癌細胞生長;ATRA則主要通過ERK和P38途徑傳遞生長抑制信號,產生與