1、目的:經(jīng)心導(dǎo)管用明膠海綿栓子栓塞豬的冠狀動脈左前降支(LAD),建立心肌梗死的模型。在心梗后1d采用心導(dǎo)管介入術(shù)經(jīng)冠狀動脈注射等量的未處理及預(yù)處理的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs),心梗4w后注射未經(jīng)處理的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。研究體外經(jīng)過預(yù)處理的MSCs抗凋亡的機(jī)制,經(jīng)冠脈注射后觀察心梗后遷移定植情況及對心肌梗死后心功能的影響,對其可能的機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　 方法:將第三代MSCs置入十二孔板培養(yǎng)皿中培養(yǎng),予以不同濃度的過氧化氫(

2、H2O2)預(yù)處理MSCs24h,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測MSCs的凋亡情況及細(xì)胞表面CXCR4蛋白表達(dá)情況,以Western Blot檢測細(xì)胞內(nèi)凋亡蛋白的表達(dá)情況。梅山豬20頭,隨機(jī)分為4組:A組為空白對照組；B組為心梗后一天移植未經(jīng)處理的MSCs；C組為心梗后一天移植經(jīng)過氧化氫預(yù)處理的MSCs；D組為心梗后4周后移植未經(jīng)處理的MSCs。應(yīng)用明膠海綿栓塞L,AD,建立心梗模型。干細(xì)胞(1×107/5 mL)經(jīng)心導(dǎo)管注射到LAD栓塞處遠(yuǎn)端。各組

3、以Powerlab+Millar壓力導(dǎo)管、ECT檢測分析心梗前、心梗后、干細(xì)胞移植后4w時(shí)心功能狀況,干細(xì)胞經(jīng)過納米鐵標(biāo)記后應(yīng)用1.5TMRI檢測移植入體內(nèi)的干細(xì)胞的遷移定植情況。干細(xì)胞移植后4w獲取動物心臟,病理切片HE染色切片觀察心肌組織學(xué)變化,普魯士藍(lán)染色檢測心肌組織內(nèi)被標(biāo)記的干細(xì)胞的定植。通過TUNEL法檢測梗死心肌周圍區(qū)心肌細(xì)胞凋亡情況,Ⅷ因子免疫組化染色計(jì)數(shù)新生血管密度。
　　 結(jié)果:不同濃度H2O2預(yù)處理的骨髓間充

4、質(zhì)干細(xì)胞,在20、50μmol/L通過流式細(xì)胞儀檢測其體外凋亡率與未處理的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞無差別(p>0.05),經(jīng)過H2O2預(yù)處理的干細(xì)胞CXCR4的表達(dá)較未處理組明顯增高(p<0.05),經(jīng)過H2O2預(yù)處理的干細(xì)胞其細(xì)胞內(nèi)抗凋亡蛋白bc1-2較未處理組明顯增多(p<0.05)。C組(預(yù)處理的MSCs組)與B組(未處理的MSCs組)對比:(1)心肌梗死一天行MSCs移植4w后LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax等指標(biāo)明顯升

5、高(p<0.05)；(2)ECT檢測MSCs移植4w后心梗面積縮小(p<0.05)；(3)經(jīng)組織4w后遷移于心肌梗死周圍區(qū)的MSCs數(shù)量明顯增多(p<0.05)；(4)Ⅷ因子免疫組化示:梗死交界區(qū)新生血管的密度明顯升高(p<0.05)；(5)Tunnel檢測移植梗死心肌的細(xì)胞凋亡明顯減少(p<0.05)。C組(經(jīng)過預(yù)處理的MSCs一天移植組)與D組(未處理的MSCs4w移植組)對比:(1)MSCs移植4w后LVDP、+dp/dtmax、

6、-dp/dtmax等指標(biāo)降低(p<0.05)；(2)ECT檢測MSCs移植4w后心梗面積縮小減少(p<0.05)；(3)Ⅷ因子免疫組化示:梗死交界區(qū)新生血管的密度降低(p<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.低濃度H2O2預(yù)處理不會增加MSCs的凋亡率,但促進(jìn)Bc1-2、CXCR4的表達(dá)。
　　 2.氧化預(yù)處理可以提高M(jìn)SCs向梗死心肌及周圍區(qū)的遷移和定植。
　　 3.經(jīng)過低濃度H2O2預(yù)處理的MSCs