1、目的:
　　構(gòu)建編碼縫隙連接蛋白connexin30(Cx30)的致病基因GJB6及其3種突變體的慢病毒過表達(dá)載體，并分析其在人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT)中的表達(dá)。
　　資料與方法:
　　構(gòu)建GJB6基因及其突變體(G11R、A88V、V37E)的過表達(dá)慢病毒載體，轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞，應(yīng)用熒光倒置顯微鏡、Realtime定量PCR法(q-pcr)、WesternBlot等檢測(cè)其表達(dá)情況，并轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞，在熒

2、光倒置顯微鏡下觀察熒光表達(dá)及蛋白的初步定位。
　　結(jié)果:
　　成功構(gòu)建了該基因野生型及突變體慢病毒表達(dá)載體，并將G11R和A88V突變體成功轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞。構(gòu)建及轉(zhuǎn)染過程中發(fā)現(xiàn):野生型重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后有強(qiáng)熒光顯示，WB檢測(cè)強(qiáng)陽性條帶;3種突變型重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后，A88V突變型轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)觀察到較強(qiáng)熒光，G11R有弱熒光，而V37E突變型未觀察到熒光或較弱，但WB檢測(cè)均有弱陽性條帶，說明目的基因有表達(dá)但較

3、野生型低。將構(gòu)建的G11R和A88V突變體慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染Hacat細(xì)胞，可觀察到弱的熒光;V37E突變型未觀察到熒光或較弱，且有HaCaT細(xì)胞大量死亡現(xiàn)象。
　　結(jié)論:
　　野生型GJB6轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞后蛋白能夠定位于細(xì)胞膜，3種突變體中只有G11R和A88V突變體可定位于細(xì)胞膜但其編碼的Cx30表達(dá)量較少，初步推測(cè)不同GJB6突變體或不能定位于角質(zhì)形成細(xì)胞膜或不能形成功能性的Cx30，影響了角質(zhì)形成細(xì)胞正常的增殖和