1、目的：了解鉤端螺旋體毒素-抗毒素系統(tǒng)中毒性蛋白VapC的功能及其對宿主細(xì)胞的毒性作用。
　　 方法：以致病性問號鉤體黃疸出血群賴型賴株基因組DNA為模板，采用PCR擴(kuò)增全長vapB、vapC、vapBC基因并構(gòu)建其原核表達(dá)系統(tǒng)。采用SDS-PAGE檢測目的重組蛋白rVapB和rVapC表達(dá)情況，Ni-NTA親和層析柱提純rVapB和rVapC。檢測rvapB和rVapC有無水解問號鉤體賴株及THP-1細(xì)胞DNA或RNA活性。分別

2、采用實(shí)時熒光定量RT-PCR和Western Blot試驗(yàn)，檢測問號鉤體賴株感染THP-1細(xì)胞前后vapB和vapC基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)水平的變化。采用免疫熒光激光共聚焦顯微鏡法檢測VapB和VapC蛋白在問號鉤體賴株感染THP-1細(xì)胞中表達(dá)情況。構(gòu)建vapB和vapC基因真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染細(xì)胞，采用CCK-8試劑檢測VapB和VapC蛋白對細(xì)胞活性的影響。
　　 結(jié)果：所克隆的vapB和vapqC基因核苷酸及氨基酸序列與文獻(xiàn)報道完全