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文檔簡介
1、普通菜豆生長習(xí)性是一個與馴化密切相關(guān)的重要農(nóng)藝性狀,易受光周期等環(huán)境影響。該性狀對株高、花期、成熟期、水分利用率、產(chǎn)量等都有重要影響,也是決定能否適宜機械化生產(chǎn)的關(guān)鍵性狀,是普通菜豆重要育種策略。因此,開展生長習(xí)性研究不僅對探索普通菜豆的起源馴化具有重要的理論意義,而且對普通菜豆育種和產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要的實踐意義。本研究選擇無限蔓生品種和有限叢生品種配置雜交組合,對分離群體進行遺傳分析,利用基于菜豆基因組數(shù)據(jù)開發(fā)的SSR標(biāo)記,采用分組分離
2、群體法,初步將該基因定位在第一連鎖群。同時針對候選區(qū)段進一步開發(fā)SSR和In/Del標(biāo)記,對目標(biāo)基因進行精細定位,為克隆和闡釋該基因的作用機制奠定了分子基礎(chǔ)。獲得主要結(jié)果如下:
1、分離群體構(gòu)建及遺傳分析
選取無限蔓生型育成品種“連農(nóng)紫蕓一號”和有限叢生地方品種“兔子腿”(F0404)構(gòu)建分離群體,獲得 F2及 F2:3群體,在北京昌平(398株)、河南南陽(338株)、黑龍江哈爾濱(295株)多地種植,對F1、F2
3、、F2:3群體進行表型調(diào)查。F1群體表型為無限蔓生型,F(xiàn)2后代分離表型為無限蔓生型和有限叢生型,不同觀察地點群體遺傳分析均符合3:1分離比,表明該性狀由單基因控制,其中無限蔓生對有限叢生為顯性。
2、多態(tài)性標(biāo)記篩選
從基于菜豆基因組數(shù)據(jù)開發(fā)的2,802個均勻分布在各染色體上的SSR標(biāo)記,篩選到310個親本間多態(tài)性標(biāo)記。在初步定位基礎(chǔ)上,針對目標(biāo)區(qū)段開發(fā)55個SSR標(biāo)記,篩選到19個親本間多態(tài)性標(biāo)記。進一步選擇該區(qū)段內(nèi)
4、15個候選基因克隆測序,開發(fā)了3個In/Del標(biāo)記In87、In89和In93用于精細定位,在B01染色體上位置依次為45,513,666 bp、45,532,820bp、45,575,103bp。
3、目標(biāo)基因初步定位
利用310個均勻分布各染色體上多態(tài)性標(biāo)記,對隱性混池和隱性親本進行連鎖分析,將目標(biāo)基因定位在第一條染色體;利用第一染色體上的標(biāo)記對作圖群體進行遺傳分析,運用IciMapping v4.0構(gòu)建連鎖遺傳
5、圖譜,將目標(biāo)基因初定位于第1條染色體p1s86和p1s91之間,命名為gh-lz,遺傳距離15.32cM,根據(jù)普通菜豆參考基因組序列,確定標(biāo)記間的物理距離約為2.5Mb。
4、gh-lz位點精細定位
針對初步定位區(qū)間開發(fā)19個多態(tài)性SSR標(biāo)記,進一步將目標(biāo)基因精細定位于45,453,003bp和45,588,349bp之間,長度為135,346bp。對目標(biāo)區(qū)段預(yù)測基因進行克隆,開發(fā)了3個In/Del標(biāo)記,利用In/D
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