1、創(chuàng)傷和手術(shù)后的骨缺損常需要植骨，故骨修復(fù)是骨科的基本問題。將編碼細(xì)胞因子的基因?qū)牍撬栝g充質(zhì)質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，再與合適的載體復(fù)合后植入骨缺損部位，可持續(xù)有效地表達(dá)細(xì)胞因子，誘導(dǎo)BMSCs向成骨細(xì)胞分化，促進(jìn)骨愈合。有研究證實(shí)，BMP-9基因轉(zhuǎn)染可促進(jìn)人BMSCs增殖及成骨轉(zhuǎn)化。本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上，觀察BMP-9基因修飾的兔BMSCs在PLGA支架中附著、生長(zhǎng)情況，為進(jìn)一步應(yīng)用此組織工程骨修復(fù)骨缺損奠定基礎(chǔ)。將細(xì)胞與可降解類生物材料等

2、復(fù)合物移植于缺損部位替代修復(fù)骨缺損是一種新的嘗試。本實(shí)驗(yàn)在基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的基礎(chǔ)上，將細(xì)胞與可降解生物材料PLGA復(fù)合物在體外短暫培養(yǎng)后移植到兔臀部肌袋內(nèi)，觀察其異位成骨的能力，探討一種實(shí)用性的骨缺損組織工程修復(fù)材料。 目的：通過人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9(BMP-9)基因修飾兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，接種PLGA(聚乳酸/羥基乙酸共聚物)支架體外構(gòu)建組織工程骨；并將復(fù)合物移植到兔臀部肌袋內(nèi)異位成骨，探索BMP-9基因

3、治療與組織工程技術(shù)相結(jié)合的可行性。 方法：貼壁法培養(yǎng)兔骨髓MSCs，體外應(yīng)用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染pEGFP-BMP-9基因; 熒光顯微鏡觀察及流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)觀察轉(zhuǎn)染效率；MSCs堿性磷酸酶活性半定量測(cè)定及Von Kossa’s鈣結(jié)節(jié)染色觀察轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞功能變化；將轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染基因的MSCs與PLGA支架共培養(yǎng)，體外構(gòu)建組織工程骨，熒光顯微鏡及掃描電鏡觀察MSCs在PLGA支架上的黏附、生長(zhǎng)狀況。短暫體外培養(yǎng)后手術(shù)將MSCs-PL

4、GA復(fù)合物分組移植到兔臀部肌袋內(nèi)；于不同時(shí)間點(diǎn)(2W、4W、8W)行X線攝片和組織切片行HE染色觀察骨基質(zhì)的生成情況，及進(jìn)行新骨成骨面積分析，并于(4W、8W)進(jìn)行組織標(biāo)本ALP測(cè)定。 結(jié)果：流式細(xì)胞學(xué)測(cè)定陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染率為34.15％；轉(zhuǎn)染組MSCs的ALP活性較未轉(zhuǎn)染組明顯增高(p＜0.05)，Von Kossa's鈣結(jié)節(jié)染色比較轉(zhuǎn)染細(xì)胞形成的鈣結(jié)節(jié)明顯大于未轉(zhuǎn)染組；熒光顯微鏡及掃描電鏡觀察見MSCs在PLGA支

5、架上的黏附、生長(zhǎng)良好。異位成骨4W X線攝片見實(shí)驗(yàn)組有骨組織成像顯示，8W后顯影增大，對(duì)照組4W時(shí)未見顯影，8W時(shí)可見模糊顯影出現(xiàn)；4W、8W組織切片臟染色見：空白對(duì)照PLGA孔隙內(nèi)無新骨形成，對(duì)照細(xì)胞組內(nèi)有部分新生骨形成，而BMP-9實(shí)驗(yàn)組形成的新生骨組織面積更大(P＜0.05)。4w、8W組織ALP檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組表達(dá)活性明顯較實(shí)驗(yàn)對(duì)照組強(qiáng)(P＜0.05)。 結(jié)論：BMP-9基因轉(zhuǎn)染BMSCs，可促進(jìn)細(xì)胞向成骨細(xì)胞增殖分化。轉(zhuǎn)