1、目的：體外分離培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞，利用陽離子脂質體介導的基因轉染法建立穩(wěn)定表達pcDNA3.1-IGF-1-BMSCs細胞株，并體外結合低血清培養(yǎng)基觀察向成骨分化的能力，為骨缺損的基因治療奠定基礎。
　　方法：1：（1）采用密度梯度離心法聯(lián)合貼壁篩選法培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞，進行體外培養(yǎng)，并通過倒置顯微鏡及HE染色觀察細胞生長情況,CD44、CD90鑒定細胞表形；（2）抗壞血酸、地塞米松及β-甘油酸鈉聯(lián)合向成骨細胞分化，堿性磷

2、酸酶及茜素紅染色鑒定成骨活性；2：（1）真核表達質粒pcDNA3.1-IGF-1的擴增純化及鑒定；（2）建立穩(wěn)定表達pcDNA3.1-IGF-1-BMSCs細胞株，免疫熒光法、RT-PCR及Westernblot檢測IGF-1表達；（3）MTT法繪制基因轉染前后的細胞增殖曲線；（4）通過ELISA法、堿性磷酸酶及VonKossa染色后對真核質粒pcDNA3.1-IGF-1轉染后的兔BMSCs體外成骨活性進行定量分析。
　　結果：1

3、、（1）兔骨髓間充質干細胞生長狀態(tài)良好，各代細胞形態(tài)基本一致；（2）抗壞血酸、地塞米松及β-甘油磷酸鈉誘導組BMSCsALP及鈣結節(jié)表達陽性；2、（1）真核表達質粒pcDNA3.1-IGF-1擴增、純化成功；（2）成功構建穩(wěn)定表達pcDNA-3.1-IGF-1-BMSCs細胞株；（3）穩(wěn)定轉染IGF-1后細胞增殖能力增強；（4）穩(wěn)定轉染IGF-1后細胞堿性磷酸酶分泌旺盛，Vonkossa染色后鏡下鈣結節(jié)計數(shù)轉染組顯著高于未轉染及空質粒轉