1、中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文SARS冠狀病毒的臨床檢測(cè)和基因變異分析研究姓名：徐東平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)傳染病學(xué)指導(dǎo)教師：張玲霞20060524軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文sA憋冠狀病毒的臨床檢測(cè)和基因變異分析研究中文摘要本研究旨在研究嚴(yán)重急性呼吸綜合誣(sAJ遲)患者臨床標(biāo)本中sARs冠狀病毒(sAI峪cov)RNA和特異性抗體的檢出特點(diǎn)、sARsCov的體外培養(yǎng)分離特點(diǎn)和病毒棘突蛋白編碼基因(s基因)和核表殼蛋白編碼

2、基因(N基因)的序列變異特點(diǎn)，以期為sARs的早期診斷，合理預(yù)防，以及對(duì)深入了解sARscoV的病毒學(xué)特點(diǎn)和s√～I(xiàn)塔的發(fā)病機(jī)制研究提供幫助。l，sARs患者臨床標(biāo)本中SARscoVRNA及特異性抗體的檢測(cè)檢測(cè)了54例sARs患者486份臨床標(biāo)本(血漿，全血痰，尿，糞便)中的sARscoVRNA，根據(jù)丑lJOl株sARscoV序列(GenB觚k序列號(hào)：AY278488)設(shè)計(jì)了N基因片段擴(kuò)增引物，結(jié)合世界衛(wèi)生組織(wH0)推薦的R基因片段

3、擴(kuò)增引物，顯著提高了用巢式反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(nc刪RTPcR)對(duì)sARS七ovRNA的檢出率，在519％(28／54)的患者中檢測(cè)到病毒RNA同時(shí)對(duì)病毒鼢m和抗s舢峪cov特異性抗體的動(dòng)態(tài)檢測(cè)表明，sARs發(fā)病前2周S舢娼covRNA陽(yáng)性率高于抗體陽(yáng)性率，對(duì)sARs早期確診有一定意義2、sARs患者糞便，尿液中sA姻《ov的培養(yǎng)鑒定用Ⅵ∞E6細(xì)胞對(duì)12例患者的2l份糞便和尿液標(biāo)本進(jìn)行了培養(yǎng)分離，用盲傳法在16份s燦峪covRNA陽(yáng)性標(biāo)

4、本中，有10份標(biāo)本培養(yǎng)分離到了活病毒，其中l(wèi)份尿液和2份糞便分別采自3例發(fā)病時(shí)間28d(2弘36d)的恢復(fù)期患者，提示sARs恢復(fù)期患者排泄物仍可能具有傳染性3、最早傳入北京地區(qū)的SA髓covs基因全序列克隆用從北京地區(qū)首批發(fā)現(xiàn)的l例sARs患者咽拭子接種細(xì)胞培養(yǎng)上清的RNA為模板，通過(guò)巢式RTPcR分6個(gè)片段擴(kuò)增出了sARsC0vs基因全序列。用分步重疊PcR連接克隆了s基因全片段，序列分析表明克隆基因與BJ01株SARscovs基因