1、耳聾是導(dǎo)致人類言語交流障礙的主要疾病，在中國人中，GJB2基因突變導(dǎo)致的先天性耳聾大約為12.2％，在NSHL未成年患者中GJB2基因突變的陽性檢出率高達20.1%，該基因突變是導(dǎo)致人類非綜合征性聾（nonsyndromic hearing loss，NSHL）的主要原因，研究其致病機制意義重大。研究表明GJB2基因條件敲除小鼠（cCx26Pax2Cre小鼠）出生后出現(xiàn)耳蝸細胞缺失，凋亡可能是GJB2基因敲除后耳蝸細胞缺失的主要原因，但

2、是目前有關(guān)具體凋亡機制尚未見報道。本研究通過對cCx26Pax2Cre小鼠凋亡相關(guān)84個基因表達變化情況進行觀察分析，探討GJB2基因突變導(dǎo)致耳聾的機制。
　　一、 cCx26Pax2Cre小鼠耳蝸凋亡相關(guān)84個基因差異表達研究
　　我們選取cCx26Pax2Cre小鼠為實驗組，野生型BALB/C小鼠作為正常對照組，取 P10和P18時小鼠，提取耳蝸膜迷路總 RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，用QRT-PCR Array檢測凋亡相關(guān)

3、的84個功能基因的表達差異。選取小鼠耳蝸組織中表達最為穩(wěn)定的甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）為內(nèi)參照。結(jié)果顯示：與野生型小鼠相比，在P10時，一共有16個基因表達有生物學(xué)意義（19.05%），14個基因表達下調(diào)(87.5%)，其中9個下調(diào)基因為抑制細胞凋亡和促進細胞增殖的基因，5個基因為促進細胞凋亡和炎癥反應(yīng)的基因；2個基因表達上調(diào)（12.5%），均為

4、促進細胞凋亡的基因。在P18時，與野生型小鼠相比，一共有4個基因(4.76%)表達變化有生物學(xué)意義，其中3個基因表達下調(diào)（75%），全部為抑制細胞凋亡的基因（100%）；1個基因（Tnfrsf10b）表達上調(diào)（25%），為促進細胞凋亡的基因。與P10相比，P18時耳蝸組織中caspase-8表達上調(diào)。Bcl2l10和Tnfrsf10b在P10、P18兩個發(fā)育階段的變化均具有生物學(xué)意義，而且促進細胞凋亡的Tnfrsf10b基因兩個時間段均

5、表達上調(diào)。
　　二、死亡受體5（Death receptor, DR5）在cCx26Pax2Cre小鼠耳蝸的表達的研究
　　選取P8、P12、P21小鼠用熒光標(biāo)記的免疫組織化學(xué)技術(shù)對表達上調(diào)的差異表達基因DR5（由Tnfrsf10b基因編碼）在耳蝸表達情況進行分析。結(jié)果顯示DR5在cCx26Pax2Cre小鼠耳蝸支持細胞、毛細胞、螺旋韌帶 II型纖維細胞、螺旋凸、螺旋緣、螺旋神經(jīng)節(jié)細胞胞漿和胞膜、螺旋緣下方蝸軸螺旋管內(nèi)神經(jīng)纖

6、維、蓋膜均有較強的陽性表達，隨小鼠日齡增加，表達逐漸增強，而在野生型小鼠耳蝸， DR5表達表現(xiàn)出不同的方式，先后在蓋膜、耳蝸支持細胞、螺旋神經(jīng)節(jié)細胞、螺旋凸處可見表達，但表達強度均弱于相應(yīng)日齡的基因敲除小鼠。與野生型小鼠相比，cCx26Pax2Cre小鼠耳蝸神經(jīng)纖維 DR5表達的光密度值明顯增大，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析差異具有顯著性意義（P<0.05）。
　　我們推測在 cCx26Pax2Cre小鼠縫隙連接功能異常，可能導(dǎo)致耳蝸細胞出現(xiàn)葡萄