1、目的：建立快速、敏感、特異、穩(wěn)定的PCR-ELISA方法，并用其檢測感染動物體內的弓形蟲。 方法：將生物素標記的PCR產物與地高辛標記的特異性探針雜交，再通過顯色反應測出OD值，以判斷弓形蟲感染情況。優(yōu)化雜交時間、探針濃度等反應條件，確定最佳反應條件。測定該方法的敏感性，并與瓊脂糖凝膠電泳結果比較。以人血淋巴細胞、小鼠血淋巴細胞、瘧原蟲、旋毛蟲等DNA為模板在同樣條件下進行測試，以確定該方法的特異性。通過對不同樣本在同一時間內的

2、重復測試和同一樣本在不同時間內的重復測試來確定該方法的穩(wěn)定性。再分別以104、103弓形蟲RH株速殖子腹腔接種小鼠，取全血、肝組織用PCR-ELISA檢測小鼠感染情況，取血清用ELISA檢測IgM，并對兩種方法的檢測結果進行比較。結果：本實驗的最佳雜交時間為30min，最佳探針濃度為3pmol/ml。該方法的最低檢測閾值為20fg弓形蟲DNA，其靈敏度是電泳法的10倍，并且與人血淋巴細胞、小鼠血淋巴細胞、瘧原蟲、旋毛蟲等DNA均無交叉反

3、應。經一致性檢驗，兩種重復測試的Alpha值分別為0.74.和0.72，表明該方法穩(wěn)定性良好。檢測感染動物肝組織及全血標本，104、103組分別在感染后第二天、第三天即可測出陽性。104組肝組織和全血標本的陽性檢出率分別為93.3％(14/15)和86.7％(13/15)；103組肝組織和全血標本的陽性檢出率分別為90.5％(19/21)和81.0％(17/21)，兩種標本的陽性檢出率無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。用ELISA檢測血清I