1、樟樹（CinnamomumcamphoraL.）是樟科樟屬的一種高大喬木，分布在中國南部各省。樟樹作用很多，有重要的經濟和材用價值。樟樹喜光，較耐水淹，樹形大，能吸收煙塵、積蓄并保持水源、防沙固土和凈化環(huán)境，是城市綠化中的優(yōu)質樹種。雖然香樟在園林綠化中應用普遍，但受氣候影響，樟樹應用有區(qū)域性差異，由于北方氣溫較低、空氣寒冷，在城市中沒有得到大量推廣。因此，本研究對樟樹的體細胞胚發(fā)生體系以及遺傳轉化體系進行優(yōu)化，為更好的導入目的基因奠定基

2、礎，同時利用優(yōu)化的轉化體系，將抗寒基因AtCBF3和LlDERB1導入樟樹中，以提高樟樹的抗寒性。主要研究結果如下:
　　1.樟樹體細胞胚發(fā)生體系的優(yōu)化
　　(1)胚齡對體細胞胚的誘導率和平均體細胞胚數有顯著的影響:開花后60天、70天、80天的樟樹合子胚體細胞胚誘導率分別為55.67％、5.92％、0％，平均誘導體細胞胚數分別為3.67、1.33、0.00。因此，實驗時選擇開花后60天的最佳。
　　(2)母株基因型對

3、體細胞胚誘導率有顯著的影響:三棵不同基因型的樟樹合子胚體細胞胚誘導率分別為55.67％、36.99％和34.33％，誘導的平均體細胞胚數分別為3.67、3.33和4。所以，不同母株基因型的體細胞胚誘導率具有顯著性差異，應選取適合的母株進行體細胞胚誘導。
　　(3)合子胚損傷對樟樹體細胞胚誘導率有顯著的影響:合子胚劃傷、子葉分開、完整合子胚體細胞胚誘導率分別為21.00％、2.83％和60.33％，因此在樟樹的體細胞胚誘導中，宜選取

4、完整的樟樹合子胚，實驗時避免損傷未成熟的合子胚。
　　2.樟樹遺傳轉化體系的優(yōu)化
　　(1)甘露醇預處理濃度和時間及預處理方式對樟樹抗性愈傷組織誘導率的影響顯著:0.4mol/L甘露醇處理4h，樟樹抗性愈傷組織的誘導率最高;其他濃度的甘露醇處理不同時間，樟樹的抗性愈傷組織誘導率均較低。0.4mol/L甘露醇固體培養(yǎng)基的抗性愈傷組織誘導率明顯高于0.4mol/L甘露醇的液體培養(yǎng)基。因此，應選甘露醇濃度為0.4mol/L的固體培

5、養(yǎng)基處理4h，以保證較高的抗性愈傷組織的誘導率。
　　(2)基因型、受體材料對樟樹的遺傳轉化具有影響，實驗時以選取狀態(tài)良好的胚性愈傷組織為宜。
　　(3)農桿菌菌株對樟樹的抗性愈傷組織誘導有顯著影響:使用菌株EHA105與LBA4404的抗性愈傷組織誘導率分別為35.33％、24.00％，所以，選擇EHA105對抗性愈傷組織的誘導較好。
　　3.轉AtCBF3和LlDREB1的抗性愈傷組織和抗性體胚的獲得
　　在