1、溫度脅迫是影響番茄作物產(chǎn)量及地域分布的主要限制因子之一，通過(guò)基因工程手段提高植物的抗性，培育耐高溫或耐低溫番茄品種是有效緩減溫度脅迫的重要途徑之一。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Solexa高通量測(cè)序，對(duì)高溫脅迫處理前后的番茄植株進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，分析了受高溫脅迫上調(diào)和下調(diào)表達(dá)的基因，揭示了番茄高溫脅迫下轉(zhuǎn)錄組水平的復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。同時(shí)，從Solexa測(cè)序下調(diào)的基因中篩選出一個(gè)番茄冷調(diào)節(jié)(Cold-regulated gene，COR)家族同源基

2、因，并從番茄品種中蔬6號(hào)葉片中分離到該基因，命名為L(zhǎng)eCOR413-TM1，對(duì)其序列特征、表達(dá)模式以及轉(zhuǎn)基因煙草的抗逆生理功能進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下:
　　(1)高溫處理番茄植株，用Solexa技術(shù)進(jìn)行序列測(cè)定，處理前后分別檢測(cè)到4661314和4981634個(gè)有信號(hào)的探針，各包含了186280和226513個(gè)特異性標(biāo)簽。去除假陽(yáng)性標(biāo)簽后，分別獲得了4563284和4862014個(gè)清晰標(biāo)簽。通過(guò)比對(duì)番茄基因數(shù)據(jù)庫(kù)，分別找到了33

3、02958(72.38％)和3211809(66.06％)個(gè)匹配的標(biāo)簽。我們以log2值（變化倍數(shù)）＞2和＜-2、P-value值（統(tǒng)計(jì)學(xué)有效值）＜0.001、FDR（錯(cuò)誤發(fā)生率）＜0.01作為篩選基因的標(biāo)準(zhǔn)，找到了284個(gè)上調(diào)基因和154個(gè)下調(diào)的基因，主要參與環(huán)境應(yīng)答的有36個(gè)上調(diào)和28個(gè)下調(diào)基因，參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控的有108個(gè)上調(diào)和36個(gè)下調(diào)基因，參與代謝的有53個(gè)上調(diào)和58個(gè)下調(diào)基因;其中未知基因約占18.9％。
　　(2)利用同

4、源序列設(shè)計(jì)引物，通過(guò)RT-PCR的方法從番茄葉片克隆到全長(zhǎng)cDNA，命名為L(zhǎng)eCOR413-TM1(AW034114)。該基因全長(zhǎng)為726bp，開(kāi)放閱讀框663bp，編碼221個(gè)氨基酸。qRT-PCR結(jié)果表明，LeCOR413-TM1在葉中表達(dá)量最高;同時(shí)，該基因的表達(dá)受4℃、PEG、ABA及強(qiáng)光誘導(dǎo)。
　　(3)將p35S-LeCOR413-TM1-GFP融合蛋白在煙草體中瞬時(shí)表達(dá)。通過(guò)Confocal觀察到GFP激發(fā)的綠色熒光

5、和葉綠素的紅色自發(fā)熒光完全重合，說(shuō)明LeCOR413-TM1基因產(chǎn)物定位于葉綠體。
　　(4)將獲得的LeCOR413-TM1基因與含有35S啟動(dòng)子的pBI121載體重組，構(gòu)建了正義過(guò)表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化煙草，用PCR和qRT-PCR的方法對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草植株進(jìn)一步檢測(cè)，結(jié)果證明成功地獲得了轉(zhuǎn)正義的煙草植株。
　　(5)在低溫(4℃)脅迫條件下，與野生型相比較，轉(zhuǎn)基因煙草的種子萌發(fā)和幼苗的生長(zhǎng)情況均好于野生型。這