1、高血糖激素(crustacean hyperglycemic homone,CHH)對甲殼動物的生長發(fā)育生殖等生理生化過程具有重要作用,參與調(diào)控甲殼動物血糖調(diào)節(jié)、生長蛻皮和性腺發(fā)育等多種重要的生理活動,能夠顯著提高血淋巴中的葡萄糖的濃度,調(diào)節(jié)甲殼動物的糖類代謝,在發(fā)育階段表現(xiàn)的尤為明顯。甲殼動物眼柄組織中高血糖激素含量最為豐富且被研究最多,也一直是國內(nèi)外研究的熱點。
　　口蝦蛄(Oratosquilla oratoria)是我國沿

2、海重要的多年生的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)甲殼類之一,具有極高的經(jīng)濟(jì)價值的優(yōu)良野生品種。近年來,人們對口蝦蛄的開發(fā)力度不斷增大,加之過度捕撈,其野生資源已出現(xiàn)衰竭的傾向,因此資源保護(hù)與增值是目前亟待解決的問題。關(guān)于國外蝦蛄的研究報導(dǎo)越來越多,但主要集中在遺傳多樣性、形態(tài)發(fā)育、生態(tài)學(xué)、組織學(xué)、養(yǎng)殖、繁育等方面,而口蝦蛄的功能基因及表達(dá)分析方面的研究報道僅此一篇。搜索CHH神經(jīng)肽,發(fā)現(xiàn)CHH在甲殼動物中的進(jìn)化關(guān)系至今尚不清楚,CHH在甲殼綱十足目類群已經(jīng)開展

3、了大量的研究工作,而口足目的尚未有相關(guān)的研究報道。因此,有必要對口足目以外的蝦蟹CHH基因特性進(jìn)行研究,為探甲殼動物生長、繁殖相關(guān)基因的功能演化及進(jìn)化關(guān)系提供重要依據(jù)。本文以口蝦蛄為實驗材料,采用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)方法克隆CHH基因全長cDNA序列,并對口蝦蛄不同組織做實時熒光定量分析,旨在為口蝦蛄蛻皮等相關(guān)功能研究和作用機(jī)制奠定基礎(chǔ),同時為其他甲殼類動物CHH家族基因的功能研究提及進(jìn)化機(jī)制提供參考。
　　本實驗以口

4、蝦蛄眼柄為材料提取總RNA,首次通過RACE方法獲得高血糖激素(CHH)基因全長cDNA序列。CHH基因全長2421bp,5’UTR長度為180bp,3’UTR為1821bp,開放閱讀框(ORF)長420bp,編碼139個氨基酸。預(yù)測蛋白二級結(jié)構(gòu)α–螺旋23.74％,延伸鏈占23.02％,無規(guī)則卷曲占53.24％,預(yù)測分子量為15.47kD,等電點(pI)為7.049。CHH成熟肽包含6個CHH家族中位置保守的Cys殘基,C端為GK,推

5、斷為ES型CHH基因。聚類分析表明:口蝦蛄CHH和十足目CHH聚為同一個分支的兩亞群,具有較近的親緣關(guān)系,而后與十足目的MIH和GIH形成一分支。采用熒光定量PCR技術(shù)首次檢測口蝦蛄不同組織中CHH基因的表達(dá)量,CHH基因在血淋巴中表含量最高,在腸、眼柄、觸角中有較高的表達(dá)量,在肌肉和卵巢中表達(dá)量相對較低,而在精巢中不表達(dá)。研究結(jié)果為進(jìn)一步口蝦蛄CHH多肽相關(guān)功能性研究和作用機(jī)制奠定基礎(chǔ),同時也為其他甲殼類動物CHH基因的研究及系統(tǒng)演化