1、石栗(Aleurites moluccana)是大戟科(Euphorbiaceae)的木本油料植物,其種子油脂含量很高,是一種很重要的生物質(zhì)能源植物。本試驗(yàn)克隆獲得石栗ACCase中BCCP(生物素羧化酶載體蛋白,biotin carboxylase carrier protein)亞基以及BC(biotin carboxylase,生物素羧化酶)亞基的編碼基因accB與accC的全長(zhǎng)cDNA序列,對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析,并通過(guò)半定量R

2、T-PCR分析這兩個(gè)基因在石栗種子不同生長(zhǎng)時(shí)期中的表達(dá)變化,為今后篩選分子標(biāo)記或研究油脂合成相關(guān)酶基因提供參考。
　　1.通過(guò)同源克隆法和RACE技術(shù)相結(jié)合,克隆得到了accB、accC這兩個(gè)基因的全長(zhǎng)cDNA序列,并推導(dǎo)出編碼區(qū)氨基酸序列。通過(guò)NCBI網(wǎng)站及相關(guān)軟件進(jìn)行分析比對(duì)。結(jié)果顯示,accB基因全長(zhǎng)cDNA序列大小為1170bp,編碼區(qū)長(zhǎng)度為798bp,編碼265個(gè)氨基酸。accB基因核苷酸序列與基因庫(kù)中已注冊(cè)的油桐、麻風(fēng)

3、樹(shù)的核苷酸酸序列的同源性依次為:93％和82%,其氨基酸序列與陸地棉、油梨、大豆、苜蓿、麻風(fēng)樹(shù)、油桐的BCCP亞基的氨基酸序列同源性分別為:91%、83%、68%、64%、61%、52%;accC基因全長(zhǎng)cDNA序列大小長(zhǎng)度為1607bp,編碼區(qū)長(zhǎng)度為1119bp,編碼372個(gè)氨基酸,accC基因核苷酸序列與油桐、麻風(fēng)樹(shù)和蓖麻的核苷酸酸序列的同源性分別為:97%、93%和91%,其氨基酸序列與麻風(fēng)樹(shù)、陸地棉、煙草、花生、大豆、擬南芥的B

4、C亞基的氨基酸序列同源性分別為:96%、91%、89%、89%、88%、83%。
　　2.采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將種子總RNA反轉(zhuǎn)錄后,獲取了高質(zhì)量的cDNA。以cDNA為模板,石栗管家基因Actin作為內(nèi)參,通過(guò)半定量RT-PCR分析了石栗accB、accC這兩個(gè)基因在石栗種子內(nèi)不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)水平變化。在種子發(fā)育過(guò)程中accB基因與accC基因表達(dá)量大致情況是:六月份>七月份>五月份,同時(shí)油脂含量從五月份至七月份三個(gè)月間是持續(xù)上升