1、體細(xì)胞核移植技術(shù)對(duì)于體外胚胎的生產(chǎn)具有重要的意義，但是體細(xì)胞核移植成功率非常低，影響了該技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用。目前認(rèn)為體細(xì)胞核移植效率低的主要原因是供體細(xì)胞的不完全重編程?？茖W(xué)家們已經(jīng)嘗試使用DNA甲基化酶抑制劑和組蛋白去乙?；敢种苿┨幚砗艘浦补w細(xì)胞或胚胎，從而提高表觀遺傳重編程的程度。本試驗(yàn)用DNA甲基化酶抑制劑5-氮-2-脫氧胞苷(5-aza-dC)和組蛋白去乙?；敢种苿┒∷徕c(Sodium butyrate，NaBu)處理水牛成纖

2、維細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)、周期和凋亡等，并移植到黃牛卵母細(xì)胞中，觀察胚胎發(fā)育情況，從而篩選兩種試劑處理供體細(xì)胞的最佳處理方式，得到如下結(jié)果與結(jié)論:
　　 1.不同濃度的NaBu對(duì)水牛成纖維細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)、細(xì)胞周期和凋亡的影響
　　 用0、0.5、1.0、2.0、2.5和3.0 mmol/L NaBu處理水牛成纖維細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)、周期和凋亡，確定處理細(xì)胞的最佳濃度。結(jié)果顯示:0.5和1.0mmol/L NaBu

3、處理的細(xì)胞形態(tài)正常，2.0、2.5和3.0mmol/L NaBu處理的細(xì)胞變大變長(zhǎng)，并出現(xiàn)大量死亡;隨著NaBu濃度的升高，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用增強(qiáng)，0.5mmol/L NaBu處理48h后的細(xì)胞抑制率與對(duì)照組無(wú)顯著差異(2.75對(duì)0，P＞0.05)，其他濃度的均有顯著性差異(P＜0.05);0.5mmol/L和1.0mmol/L NaBu處理細(xì)胞的G0/G1期和S期細(xì)胞比例與對(duì)照組無(wú)顯著性差異（P＞0.05），2.0、2.5、3.0mm

4、ol/L處理的G0/G1期和S期細(xì)胞比例有顯著性差異(P＜0.05);0.5 mmol/L和1.0mmol/LNaBu處理的早期凋亡與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P＞0.05)，2.0、2.5、3.0mmol/L處理與對(duì)照組差異顯著(P＜0.05);0.5mmol/L NaBu處理的晚期凋亡與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P＞0.05)，其他組均與對(duì)照組有顯著差異(P＜0.05）。從結(jié)果可知:0.5mmol/L和1.0mmol/L NaBu對(duì)細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)、

5、周期和凋亡影響較小，適合作為處理供體細(xì)胞的濃度。
　　 2.5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對(duì)水牛成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)、周期和凋亡的影響
　　 根據(jù)本課題組前期的試驗(yàn)結(jié)果，選擇0.01μmol/L5-aza-dC處理水牛成纖維細(xì)胞72h，1.0mmol/L NaBu處理48h和兩種試劑聯(lián)合處理，檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)、周期和凋亡。結(jié)果顯示:聯(lián)合處理比單獨(dú)使用5-aza-dC、NaBu以及對(duì)照組對(duì)細(xì)胞抑制作用顯著增強(qiáng)(P＜0.05);5

6、-aza-dC對(duì)細(xì)胞周期無(wú)明顯影響，NaBu和聯(lián)合處理可使細(xì)胞顯著阻滯于G0/G1期（P＜0.05）;聯(lián)合處理的正常細(xì)胞數(shù)比5-aza-dC和對(duì)照組處理均顯著減少(P＜0.05)，而與NaBu組無(wú)顯著差異(P＞0.05)，聯(lián)合處理晚期凋亡比5-aza-dC、NaBu以及對(duì)照組顯著增加(P＜0.05)，各試驗(yàn)組早期凋亡無(wú)顯著差異。以上結(jié)果說(shuō)明了聯(lián)合處理組能夠顯著影響細(xì)胞生長(zhǎng)、周期和凋亡。
　　 3.5-aza-dC和NaBu處理供

7、體細(xì)胞對(duì)水牛-黃牛異種核移植胚胎的影響
　　 用0.01 mol/L5-aza-dC處理水牛成纖維細(xì)胞72h，1.0mmol/L NaBu處理48h，和兩種試劑聯(lián)合處理的細(xì)胞進(jìn)行水牛-黃牛異種核移植，并以未處理組及同種核移植作對(duì)照。結(jié)果顯示:水牛-黃牛異種體細(xì)胞核移植胚胎的2-細(xì)胞，8-16-細(xì)胞及囊胚發(fā)育率均顯著低于同種體細(xì)胞核移植胚胎(P＜0.05);1.0mmol/L NaBu處理的細(xì)胞作為供體細(xì)胞進(jìn)行水牛-黃牛異種體細(xì)胞