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文檔簡介
1、磷酸乙醇胺氮甲基轉移酶(PEAMT)是合成膽堿的關鍵酶,膽堿是合成甜菜堿的底物,甜菜堿是一種小分子滲透調節(jié)劑,在植物抵抗?jié)B透脅迫中起一定的作用。已經克隆了多種植物的PEAMT基因,該基因的表達受鹽誘導。本文對遼寧堿蓬SIPEAMT啟動子進行研究。主要內容與結果如下:
通過TAIL-PCR方法獲得了遼寧堿蓬SIPEAMT基因上游序列(1450bp),TSSP-TCM軟件預測位于起始密碼子上游-340bp處的T是轉錄起始位點,
2、由此獲得了SIPEAMT基因上游897bp的啟動子序列。PLACE和PlantCARE序列分析表明,SIPEAMT啟動子序列含有基本的轉錄元件:TATA-box和非生物脅迫相關元件:MYBCORE,MBS,LTR,W-box,MYC識別位點,GT-1元件,WRKY710S和LTRECOREATCOR15等。
為了進一步研究獲得的啟動子的功能,我們對遼寧堿蓬SIPEAMT基因啟動子進行了5’端缺失分析,通過PCR擴增獲得了3
3、個5’端缺失片段,分別為pP1(-897~+343bp)、pP2(-817~+343bp)、pP3(-364~+343bp)。將缺失片段分別插入到pCAMBIA1301載體中來替代CaMV35S啟動子,獲得了缺失表達載體,分別命名為pCAMBIA1301-pP1,pCAMBIA1301-pP2和pCAMBIA1301-pP3。
通過農桿菌介導的葉盤轉化法獲得了各缺失載體轉基因煙草。經過PCR檢測、GUS組織化學染色檢測,獲
4、得轉基因陽性植株。
通過GUS組織化學染色和熒光定量分析研究轉基因煙草中各啟動子缺失片段的鹽誘導功能特性。非脅迫條件下,轉基因煙草葉片的GUS酶活性低。鹽脅迫處理后,轉基因煙草葉片GUS酶活性有顯著的提高。在250mmolL-1NaCl情況下,pP1(-897~+343bp)啟動子片段的轉基因煙草的GUS酶活性比未經脅迫處理的增加18.6倍。
本研究表明,SIPEAMT基因啟動子pP1(-897to+343b
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