1、核酸作為重要的遺傳信息生物分子，其檢測被廣泛的應(yīng)用在食品安全、生物醫(yī)學(xué)檢測、環(huán)境檢測等諸多領(lǐng)域。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是目前應(yīng)用最廣泛的核酸擴增檢測方法之一，然而PCR技術(shù)需要專門的熱循環(huán)儀，限制了其在疾病的即時診斷等領(lǐng)域的應(yīng)用。因此，發(fā)展更靈敏、快速的核酸等溫檢測方法具有重要意義。本文構(gòu)建了幾種簡單、快速的核酸等溫擴增檢測新方法，分別對DNA和RNA進(jìn)行了快速、靈敏和特異地檢測。
　　本研究建立了一種基于雙切口分子信標(biāo)的等溫擴

2、增檢測DNA新方法的研究。用該方法對提取的大腸桿菌16S rDNA進(jìn)行實時熒光檢測，當(dāng)檢測靶標(biāo)的量在100fmol到10amol之間時呈良好的線性，最低檢測限為10amol；通過在引物上設(shè)計突變堿基進(jìn)行檢測，驗證了該方法具有較強的特異性；并用該方法在復(fù)雜體系中檢測時呈現(xiàn)較強的抗干擾能力。此外，它是一鍋式的等溫鏈置換擴增方法，不需要額外的操作步驟，極大的簡化了實驗步驟，并降低了樣品污染的可能性。它的這些優(yōu)點使該方法在核酸的現(xiàn)場快速檢測及即

3、時檢測（POCT）中更具有實用性。目前的RNA檢測方法中，大部分都需要利用反轉(zhuǎn)錄酶將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA后再進(jìn)行擴增檢測。構(gòu)建了三種無需加反轉(zhuǎn)錄酶可直接等溫擴增RNA的實驗方案，實現(xiàn)了對RNA的快速“一步法”檢測。這幾種方法都利用了本實驗室發(fā)現(xiàn)的Bst DNA聚合酶既具有DNA聚合酶活性又具有內(nèi)在的反轉(zhuǎn)錄酶活性的特點；此外，還充分的利用了DNA聚合酶的鏈置換活性及與切刻酶聯(lián)用的擴增放大機理，最終實現(xiàn)了信號的多重放大。最優(yōu)方法對大腸桿菌