1、隨著分子生物學的發(fā)展，核酸擴增檢測技術得到迅速發(fā)展。PCR技術是目前廣泛應用的核酸擴增檢測技術之一。但是，該技術對溫度條件依賴，需要復雜的變溫設備，以及實驗環(huán)境苛刻，難以滿足人們對簡便、快速、易操作的分析技術的需求。結合高效工具酶建立起來的等溫核酸擴增技術彌補了這些不足，在現(xiàn)場分析和應急事件中表現(xiàn)出來的優(yōu)勢越來越明顯。
　　本論文中構建了兩種基于工具酶的等溫核酸檢測新方法。在第二章中結合分子信標構建了一種反應快速，體系簡便的用于m

2、icroRNA檢測的方法，并且以microRNA Let-7a為靶標對方法進行了驗證。該方法通過帶有酶切位點的分子信標，在兩種工具酶的作用下利用鏈置換原理實現(xiàn)了檢測信號的兩重循環(huán)放大。利用此方法對不同濃度的Let-7a靶標進行檢測，在濃度范圍10zmol-1 fmol，表現(xiàn)出良好的線性關系，最低檢測限為8.5×10-15M，并且對人腦全RNA檢測中表現(xiàn)出較好的實用性。
　　針對目前大部分生物體內(nèi)核酸是以DNA雙鏈形式存在的情況，在

3、第三章中從設計的三個方案中優(yōu)選一種單引物核酸等溫擴增檢測雙鏈DNA方法。此方法首先借助切刻內(nèi)切酶對雙鏈DNA特異識別產(chǎn)生切口，利用具有鏈置換活性的聚合酶將雙鏈DNA線性轉換成單鏈DNA靶標，以擴增的單鏈靶標為模板設計單引物進行三重熒光信號的實時放大反應。此方法以PBS質粒DNA對實驗條件進行了優(yōu)化，在最優(yōu)條件下，實現(xiàn)了1.0×10-13 M的靶標的靈敏檢測。此方法中只需設計一條引物分子，方法體系簡單，反應快速，以期能很好的應用于進行現(xiàn)場