1、氣管移植應(yīng)用于因腫瘤、創(chuàng)傷等原因致使氣管切除后的氣管重建。但是，在臨床與基礎(chǔ)研究中，氣管移植術(shù)后移植體均存在不同程度的狹窄。研究者通過改變氣管血供、氣管免疫因素等多種方法嘗試解決氣管移植體狹窄，但是均沒有達(dá)到滿意的效果。最近有學(xué)者提出氣管移植體狹窄中存在上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化，并且上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化在氣管移植體狹窄中發(fā)揮重要作用。
　　上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化，是指在外界刺激因子的刺激作用下上皮細(xì)胞發(fā)生向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的一種過程，主要表現(xiàn)為上皮細(xì)胞

2、在形態(tài)學(xué)上由典型的鵝卵石樣變?yōu)殚L條形、梭形樣的間質(zhì)細(xì)胞，多種上皮細(xì)胞表型分子如 E-cadherin，ZO-1等表達(dá)下調(diào)，伴隨著間質(zhì)細(xì)胞表型分子如α-SMA、vimentin等表型分子的增加。研究表明，TGF-β/Smad信號通路是調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化最主要的信號通路。同時(shí)，轉(zhuǎn)錄因子ZEB-1，Snail1等也都參與調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化。中藥丹參酮IIA磺酸鈉注射液(TIIA)已被證實(shí)有較強(qiáng)的抗纖維化、抗炎、抗腫瘤等作用。查閱文獻(xiàn)，目前

3、沒有針對TIIA作用于氣管移植后移植體狹窄的報(bào)道研究，本實(shí)驗(yàn)擬采用 Wistar大鼠-SD大鼠氣管原位移植模型，腹腔注射TIIA，研究目的為觀察TIIA對移植體狹窄的抑制作用。
　　目的：實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖峭ㄟ^建立wistar-SD大鼠原位氣管移植模型以及EMT細(xì)胞模型，闡明TIIA在體外實(shí)驗(yàn)中對EMT的抑制作用及其機(jī)制以及在體實(shí)驗(yàn)中TIIA對氣管移植后移植體的作用。
　　方法：①將wistar大鼠5-6個(gè)環(huán)的氣管原位移植入按體重匹

4、配SD大鼠。移植后大鼠分為2組。實(shí)驗(yàn)組(n=25)腹腔注射TIIA（75mg/kg，1/日），對照組(n=25)腹腔注射相同劑量的5％葡萄糖（75mg/kg，1/日）。大鼠移植后第3、7、10、14、35、90天分別處死對照組與實(shí)驗(yàn)組大鼠。②HE染色對比兩組大鼠移植體狹窄程度。③免疫組織化學(xué)的方法檢測轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）表達(dá)量。④TGF-β1誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞建立EMT細(xì)胞模型，TIIA抑制EMT的作用機(jī)制。⑤免疫組織化學(xué)的方法

5、檢測TIIA對上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響以及信號通路蛋白 p-Smad2/3和轉(zhuǎn)錄因子 ZEB1、Snail1表達(dá)量的影響。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立wistar-SD大鼠的原位氣管移植模型。術(shù)后大鼠整體存活率在90%以上,移植后大鼠最長存活時(shí)間超過180天。
　　2.大鼠在氣管移植后的第2-7天內(nèi)出現(xiàn)不同程度的氣喘及哮鳴音，移植后10天該癥狀逐漸消失。
　　3.氣管移植后十天，HE染色可見上皮覆蓋雜亂，但上皮覆

6、蓋完整；馬松染色可見上皮下纖維沉積，術(shù)后第90天可見管腔堵塞。
　　4.在氣管移植后第35、90天，TIIA明顯減少氣管移植后移植體的纖維化率與LCR，
　　5. TGF-β1主要表達(dá)在氣管軟骨、氣管粘膜下層以及氣管粘膜層。通過計(jì)算Log10（IOD）值，移植后的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)移植體內(nèi) TGF-β1表達(dá)量兩組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6.細(xì)胞免疫熒光表明， TGF-β1(10 ng/mL)（對照組）誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞，與

7、空白對照組相比，支氣管上皮細(xì)胞E-cadherin表達(dá)量減少，間質(zhì)表型分子α-SMA及vimentin表達(dá)量明顯增加，但TIIA實(shí)驗(yàn)組的E-cadherin表達(dá)量較對照組增多，間質(zhì)表型分子α-SMA及vimentin表達(dá)量明顯比對照組少。western blot示：與空白對照組相比，TGF-β1, TIIA和 TGF-β1+TIIA組 E-cadherin的相對表達(dá)變?yōu)?.50±0.06，0.95±0.06，0.70±0.04( P<0

8、.05)；與空白對照組相比，TGF-β1, TIIA和TGF-β1+TIIA組α-SMA的相對表達(dá)變?yōu)?.85±0.15，1.25±0.06，1.96±0.11(P<0.05)；與空白對照組相比，TGF-β1, TIIA和 TGF-β1+TIIA組 vimentin的相對表達(dá)變?yōu)?.89±0.08，1.08±0.06，1.49±0.11,(P<0.05)。western blot示：對照組中信號通路蛋白p-Smad2/3和轉(zhuǎn)錄因子ZEB

9、1、Snail1和twist1表達(dá)量明顯增多。TIIA實(shí)驗(yàn)組抑制p-Smad2/3以及轉(zhuǎn)錄因子ZEB1、Snail1。但轉(zhuǎn)錄因子twist1表達(dá)量沒有明顯影響。
　　7.與對照組相比，移植后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)組 E-cadherin表達(dá)量明顯增加， vimentin表達(dá)量明顯減少。術(shù)后第7天，相對于對照組E-cadherin表達(dá)量（6.43±0.05)，實(shí)驗(yàn)組 E-cadherin表達(dá)量（6.95±0.11)（P<0.05），相對于

10、對照組 vimentin表達(dá)量（4.99±0.09)，實(shí)驗(yàn)組vimentin表達(dá)量（4.47±0.06)（P<0.05），暗示TIIA明顯抑制氣管移植后移植體內(nèi)EMT。
　　與空白對照組相比(log10(IOD)=0.45)，氣管移植后信號通路蛋白p-Smad2/3移植體內(nèi)明顯增多。與對照組相比，移植后第7天TIIA明顯減少信號通路蛋白p-Smad2/3表達(dá)量，兩組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.012）。本實(shí)驗(yàn)中證明轉(zhuǎn)錄因子 ZEB1

11、、Snail1參與移植后移植體內(nèi)EMT。轉(zhuǎn)錄因子ZEB1主要表達(dá)在細(xì)胞核，術(shù)后第三天在移植體內(nèi)明顯表達(dá)并達(dá)到最大值，但術(shù)后3天后整體呈減少趨勢，于術(shù)后第35天已無法檢測到表達(dá)。轉(zhuǎn)錄因子 Snail1主要表達(dá)在細(xì)胞核及細(xì)胞漿，術(shù)后第三天在移植體內(nèi)明顯表達(dá)并在移植后第3天達(dá)到高峰，雖然在移植術(shù)后3天后Snail1表達(dá)量呈減少趨勢，但在術(shù)后第10天呈小波峰增多，術(shù)后第35天已無法檢測到表達(dá)。相對于對照組，實(shí)驗(yàn)組在術(shù)后第3天抑制 ZEB1表達(dá)(