1、急性白血病是造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病，在近年來(lái)其發(fā)病率和死亡率呈增加趨勢(shì)，是一種較常見(jiàn)的惡性腫瘤，嚴(yán)重地威脅著人類的健康。白血病的發(fā)生、發(fā)展是多基因、多事件累積的結(jié)果，其過(guò)程涉及到許多瘤基因的激活和或抑瘤基因的失活，因此從分子水平闡明白血病的發(fā)病機(jī)制對(duì)白血病的防治具有十分重要的意義。 DLK1基因定位于人染色體14q32，全長(zhǎng)1557 bP，編碼序列（coding sequence，CDS）含有1152核苷酸，編碼383個(gè)氨基

2、酸殘基。DLK1基因在肝癌、大鼠的嗜鉻細(xì)胞瘤、人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤、人類肺小細(xì)胞癌、腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)上調(diào)，在腎細(xì)胞癌中表達(dá)下調(diào)，能夠高表達(dá)DLK1的腫瘤似乎都具有神經(jīng)內(nèi)分泌的特性。而DLK1在其他惡性腫瘤如白血病中的表達(dá)特性尚需進(jìn)一步探討。 目的： 研究DLK1基因在急性白血病中的表達(dá)，及其與外周血白細(xì)胞數(shù)量、血小板數(shù)量的關(guān)系，以及在紅系分化中的作用。探討其在白血病中表達(dá)的意義。 方法： 1.采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶

3、鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）、western blotting方法檢測(cè)人類不同類型急性白血病中DLK1的表達(dá)，分析DLK1表達(dá)與急性白血病病人臨床特征的相關(guān)性。 2.以人K562細(xì)胞株為研究對(duì)象，用氯化高鐵血紅素（hemin）誘導(dǎo)其向紅系分化，在分化的各時(shí)間點(diǎn)抽取RNA，用RT-PCR法測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)DLK1的表達(dá)情況，觀察其與紅系分化的關(guān)

4、系。 結(jié)果： 1.65例急性白血病患者和34例對(duì)照組的骨髓單個(gè)核細(xì)胞總RNA經(jīng)RT-PCR后均擴(kuò)增出一條252bP的目的cDNA片段，提示白血病細(xì)胞、正常骨髓單個(gè)核細(xì)胞表達(dá)DLK1。與內(nèi)參GAPDH相比，急性白血病患者表達(dá)量為0.574±0.173，其中急性淋巴細(xì)胞白血病患者表達(dá)量為0.579±0.172，急性髓系白血病患者表達(dá)量為0.571±0.175，對(duì)照組表達(dá)量為0.488±0.160，試驗(yàn)組DLK1的相對(duì)表達(dá)量均

5、高于正常對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較有顯著性差異（t=-2.406，P=0.018； t=-2.023，P=0.048； t=-2.146，P=0.035），急性淋巴細(xì)胞白血病患者和急性髓系白血病患者之間DLK1的相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著差異（P>0.05）。 2.65例急性白血病患者外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)和血小板計(jì)數(shù)，經(jīng)pearson相關(guān)分析，結(jié)果顯示DLK1基因的表達(dá)水平與白血病患者外周血白細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯相關(guān)性（r=-0.178，P=0.15

6、5）；與外周血血小板數(shù)亦無(wú)明顯相關(guān)性（r=-0.195，P=0.120）。 3.20例急性白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞所抽提的蛋白經(jīng)western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，急性白血病病人中，6/16 AML，2/4 ALL低表達(dá)DLK1蛋白，1/13對(duì)照組表達(dá)極低水平的DLK1蛋白，DLK1蛋白在急性白血病和對(duì)照組中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=4.146，P=0.042），但同一樣本DLK1蛋白的表達(dá)和mRNA的表達(dá)不一致。K5

7、62細(xì)胞表達(dá)DLK1蛋白，HL-60細(xì)胞不表達(dá)DLK1蛋白。 4.K562細(xì)胞的總RNA經(jīng)RT-PCR后擴(kuò)增出一條252bP的目的cDNA片段，提示K562細(xì)胞表達(dá)DLK1。HL-60細(xì)胞未擴(kuò)增出條帶，不表達(dá)DLK1。通過(guò)RT-PCR檢測(cè)了hemin誘導(dǎo)K562細(xì)胞向紅系分化過(guò)程中各時(shí)間點(diǎn)DLK1mRNA的變化，顯示隨著K562向紅系分化，DLK1mRNA的水平逐漸下降。 結(jié)論： 1.急性白血病細(xì)胞、正常骨髓單個(gè)