內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶-1各亞型在大鼠主動(dòng)脈縮窄所致心肌肥厚模型中的表達(dá)差異以及內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶-1亞型特異性抗體的制備.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:心肌肥厚是心肌工作超負(fù)荷的一種適應(yīng)性反應(yīng),是引起心血管疾病發(fā)生率和死亡率顯著升高的獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。本實(shí)驗(yàn)通過縮窄大鼠腹主動(dòng)脈建立心肌肥厚模型,研究心肌組織內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶-1(ECE-1)及其各個(gè)亞型的變化情況。并針對(duì)各個(gè)亞型特異性肽段,使用免疫多肽片斷-KLH蛋白偶聯(lián)法制備針對(duì)各亞型的多克隆抗體,并初步檢測(cè)抗體的效價(jià)和特異性。 方法:采用大鼠腹主動(dòng)脈縮窄法建立心肌肥厚模型。健康SD大鼠隨機(jī)分為六組:①假手術(shù)組2周(n=8),

2、②腹主動(dòng)脈縮窄組2周,③假手術(shù)組4周(n=8)④腹主動(dòng)脈縮窄組4周(n=12),⑤假手術(shù)組6周(n=8),⑥腹主動(dòng)脈縮窄組6周(n=12)。測(cè)定血壓,血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo),超聲心動(dòng)圖以及心肌組織ANP表達(dá)量等以確定心肌肥厚模型的成功建立,RT-RCR及western法分別測(cè)量ECE-1的表達(dá)量,RT-PCR法測(cè)量四種亞型在肥厚心肌組織中的表達(dá)差異。同時(shí)測(cè)量各組心肌組織中前原內(nèi)皮素-1(RT-PCR)和內(nèi)皮素-1(ELISA)的含量,從而間接反

3、應(yīng)內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶-1的活性。 人工合成針對(duì)各亞型的特異性肽段,交連到馬來酰亞胺活化的mcKLH蛋白上后與佐劑混合免疫家兔,獲得兔抗人的亞型特異性抗血清并通過ELISA法測(cè)量抗體效價(jià)及特異性。 結(jié)果:①與對(duì)照組比較,心肌肥厚組SBP、LVMI、LVSP、IVS等都顯著增高(p<0.05),光鏡下見心肌細(xì)胞肥大、肌纖維增粗。②心肌肥厚組心肌組織ECE-1的表達(dá)明顯增加(p<0.01),且呈現(xiàn)時(shí)間依賴型。③心肌肥厚組心肌組織EC

4、E-1a,1c亞型表達(dá)較假手術(shù)組明顯升高(p<0.05),而ECE-1b和1c亞型未見升高。④各實(shí)驗(yàn)組preproET-1表達(dá)量未見明顯變化,而心肌肥厚組心肌組織中內(nèi)皮素-1的表達(dá)量較假手術(shù)組明顯升高(p<0.05)。⑤獲得兔抗人ECE-1a,1b,1d和抗ECE-1bcd抗血清,間接ELISA測(cè)定抗體滴度≥1:5000,并有良好的特異性。結(jié)論①壓力超負(fù)荷心肌肥厚大鼠ECE-1表達(dá)明顯增加,加速內(nèi)皮素-1的產(chǎn)生,促進(jìn)大鼠心肌肥厚的發(fā)生發(fā)

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