1、腦膠質(zhì)瘤是一種難根治、易復(fù)發(fā)的常見(jiàn)腫瘤。近來(lái)國(guó)外研究證實(shí)：p16基因表達(dá)下降可能也是誘發(fā)因素之一。 p16基因的功能產(chǎn)物P16蛋白能使細(xì)胞增殖受到控制。pl6基因5'CpG島甲基化導(dǎo)致p16基因轉(zhuǎn)錄抑制而使P16表達(dá)下降，這必然削弱其對(duì)細(xì)胞增殖的控制，從而導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。 本研究采用甲基化特異PCR技術(shù)(MSP法冊(cè)究腦膠質(zhì)瘤組織p16基因甲基化，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系；采用RT-PCR技術(shù)和半定量測(cè)定p16cDN

2、A擴(kuò)增產(chǎn)物的光密度來(lái)測(cè)定p16mR3IA的表達(dá)；采用免疫組織化學(xué)染色來(lái)測(cè)定p16蛋白的表達(dá)，同時(shí)測(cè)定另外兩個(gè)基因P53(突變型P53蛋白)，Ki67蛋白的表達(dá)。 56例腦膠質(zhì)瘤組織中有10例(17.9％)呈p16CpG區(qū)甲基化陽(yáng)性。膠質(zhì)瘤的p16CpG區(qū)甲基化與性別、年齡無(wú)關(guān)，而與腫瘤級(jí)別、浸潤(rùn)與否有關(guān)。有浸潤(rùn)的腦膠質(zhì)瘤p16CpG區(qū)甲基化明顯高于暫無(wú)浸潤(rùn)者。p16CpG區(qū)甲基化也多發(fā)生于ⅡI級(jí)、Ⅳ級(jí)(即腫瘤惡性程度高)的病例。

3、 正常組織p16cDNA的PCR產(chǎn)物光密度值較高。未甲基化標(biāo)本p16cDNA的PCR產(chǎn)物光密度值低于正常組織，甲基化標(biāo)本p16cDNA的PCR產(chǎn)物光密度值更低。甲基化標(biāo)本p16cDNA的PCR產(chǎn)物光密度值低于正常組織是因?yàn)閜l6基因5，CpG島甲基化導(dǎo)致p16基因轉(zhuǎn)錄抑制。未甲基化標(biāo)本p16cDNA的PCR產(chǎn)物光密度值低于正常組織是因?yàn)槿笔Ш屯蛔円约捌渌羌谆瘷C(jī)制導(dǎo)致p16基因mRNA水平的下降。 正常組織P16組化染

4、色陽(yáng)性較高，而未甲基化標(biāo)本和甲基化標(biāo)本P16組化染色陽(yáng)性低于正常組織。40.0％的甲基化標(biāo)本P16組化染色結(jié)果陰性。甲基化標(biāo)．本p16基因蛋白表達(dá)的水平低于正常組織是因?yàn)閜l6基因5'CpG島甲基化導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄抑制，而使其蛋白表達(dá)下降。缺失和突變以及其他非甲基化機(jī)制也可導(dǎo)致p16基因蛋白表達(dá)下降。 突變型P53、Ki67是顯示細(xì)胞快速增殖的兩個(gè)指標(biāo)。正常組織突變型P53、Ki67組化染色結(jié)果陰性。而未甲基化標(biāo)本和甲基化標(biāo)本突變型

5、P53、Ki67組化染色結(jié)果高于正常組織。50.0％甲基化標(biāo)本突變型P53、Ki67染色結(jié)果在++一—+++之間。正常組織由于p16基因的功能產(chǎn)物P16蛋白使得細(xì)胞增殖受到控制(如前所述)。甲基化標(biāo)本因?yàn)閜16基因5'CpG島甲基化導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄抑制，而使其蛋白表達(dá)下降，其對(duì)細(xì)胞增殖的控制力下降。細(xì)胞增殖失控，突變型P53、Ki67蛋白表達(dá)顯著上升。未甲基化標(biāo)本因?yàn)槿笔Ш屯蛔円约捌渌羌谆瘷C(jī)制導(dǎo)致p16基因改變，其蛋白表達(dá)下降。同樣失去

6、了對(duì)細(xì)胞增殖的控制，突變型P53、Ki67蛋白表達(dá)上升，細(xì)胞大量增殖。 本研究顯示：腦膠質(zhì)瘤的惡性程度越高，p16CpG區(qū)甲基化發(fā)生率升高，p16基因轉(zhuǎn)錄受到抑制，P16蛋白表達(dá)降低，突變型P53蛋白、Ki67蛋白表達(dá)升高。這說(shuō)明pl6基因5'CpG島甲基化導(dǎo)致p16基因轉(zhuǎn)錄抑制而使p16表達(dá)下降，這必然削弱其對(duì)細(xì)胞增殖的控制，從而導(dǎo)致細(xì)胞增殖活性惡性升高，最終腫瘤形成。 p16基因甲基化的檢測(cè)可作為腦膠質(zhì)瘤診斷的輔助手