1、目的：
　　建立以高血糖、氧化損傷、胰島素抵抗和胰島素分泌缺陷為主要特征的大鼠2型糖尿病模型(Type2DiabetesMellitus，T2DM)，篩選11種中藥總皂苷的抗氧化、清除自由基、抗糖基化、抑制α-淀粉酶和促進(jìn)胰島βTC3細(xì)胞分泌胰島素的活性，活性最優(yōu)的用于大鼠T2DM模型，觀察其對(duì)氧化損傷和T2DM相關(guān)指標(biāo)的影響，并對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行抗糖尿病(diabetesmellitus，DM)活性

2、篩選。
　　方法：
　　1.總皂苷的藥理活性篩選。常規(guī)方法提取中藥總皂苷，并利用香草醛-硫酸比色法檢測(cè)總皂苷的含量。通過(guò)檢測(cè)11種中藥總皂苷對(duì)ascorbate/Fe2+、過(guò)氧基異丙苯(cuminehydroperoxide,CHP)和CCl4/還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reducedformofnicotinamideadeninedinucleotidephosphate，NADPH)誘導(dǎo)的大鼠肝臟微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化

3、的抑制程度來(lái)評(píng)價(jià)其抗氧化能力。通過(guò)檢測(cè)總皂苷對(duì)2,2′-二苯基-1-苦肼基(2,2′-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的清除率，評(píng)價(jià)總皂苷清除自由基的能力。通過(guò)特異性的δ-葡萄糖酸內(nèi)酯(δ-gluconolactone,δ-Glu)實(shí)驗(yàn)、牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)-葡萄糖實(shí)驗(yàn)和N-乙酰-甘氨酰-賴(lài)氨酸甲酯(N-acetyl-glycyl-lysinemethylest

4、er,GK)-核糖實(shí)驗(yàn)比較中藥總皂苷對(duì)不同階段糖基化反應(yīng)形成的抑制作用。通過(guò)檢測(cè)麥芽糖的濃度評(píng)價(jià)中藥總皂苷對(duì)α-淀粉酶的作用。通過(guò)檢測(cè)胰島βTC3細(xì)胞釋放胰島素的量評(píng)價(jià)中藥總皂苷刺激胰島β細(xì)胞釋放胰島素的活性。
　　2.大鼠T2DM模型的復(fù)制。給予大鼠高脂高糖除抗氧化劑飼料聯(lián)合小劑量多次注射鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ)，誘導(dǎo)大鼠T2DM模型。公式計(jì)算胰島素敏感指數(shù)判斷胰島素抵抗，胰腺灌流技術(shù)判斷胰島素分泌情況。<

5、br>　　3.楤木總皂苷對(duì)大鼠T2DM的藥效學(xué)研究。分別按62.5mg/kg、125.0mg/kg和250.0mg/kg的劑量灌胃給予活性最優(yōu)的總皂苷(一天一次)治療T2DM大鼠30天，檢測(cè)血清、肝臟、骨骼肌和脂肪組織的相關(guān)氧化損傷指標(biāo)，取胰腺做病理學(xué)評(píng)價(jià)。
　　4.楤木總皂苷中化學(xué)成分的分離及藥理活性篩選。采用硅膠柱色譜和制備型高效液相色譜(highperformanceliquidchromatography,HPLC)等分離

6、技術(shù)，對(duì)活性最優(yōu)的總皂苷的化學(xué)成分進(jìn)行了分離純化，借助波譜技術(shù)對(duì)分離到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并通過(guò)體外及大鼠活體組織實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯?duì)化合物的抗氧化、清除自由基、抗糖基化和促進(jìn)胰島βTC3細(xì)胞分泌胰島素的活性進(jìn)行篩選。
　　1.總皂苷的藥理活性篩選。楤木中總皂苷的含量最高，約為45.93％(w/w)，本研究考察的11種中藥總皂苷具有不同的藥理活性，綜合各方面因素評(píng)價(jià)，楤木總皂苷將作為重點(diǎn)藥物進(jìn)行進(jìn)一步的分離鑒定。
　　2.大鼠T2D

7、M模型的復(fù)制。通過(guò)給予大鼠高脂高糖除抗氧化劑飼料，使其處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，大鼠機(jī)體氧自由基生成增加，抗氧化能力減弱，脂質(zhì)過(guò)氧化作用加強(qiáng)，導(dǎo)致胰島素抵抗，再聯(lián)合小劑量多次注射STZ，誘發(fā)了胰島素分泌缺陷和高血糖。
　　3.楤木總皂苷對(duì)大鼠T2DM的藥效學(xué)研究。不同劑量的楤木總皂苷能不同程度地改善T2DM大鼠的氧化損傷情況，楤木總皂苷雖未能將T2DM大鼠的血糖降至正常水平，但是250.0mg/kg劑量的楤木總皂苷能使T2DM大鼠的血糖水

8、平明顯下降，與T2DM模型組相比有顯著性差異(P<0.05)，形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)表明給予楤木總皂苷后，光鏡下T2DM大鼠胰腺有逐步恢復(fù)的趨勢(shì)，但是胰島功能卻沒(méi)有明顯的改善。
　　4.楤木總皂苷中化學(xué)成分的分離及藥理活性篩選。從楤木總皂苷中分離出了12個(gè)化合物，其中TA35在體外具有很強(qiáng)的抗糖基化和刺激胰島βTC3細(xì)胞釋放胰島素的作用。
　　結(jié)論：
　　系統(tǒng)研究了11種臨床常用的中藥總皂苷的抗T2DM活性，綜合各方面因素評(píng)價(jià)，楤

9、木總皂苷可能是具有潛在應(yīng)用價(jià)值的T2DM治療藥物；本研究復(fù)制的T2DM模型雖然還不能完全反映人類(lèi)T2DM進(jìn)展的復(fù)雜過(guò)程，但至少對(duì)氧化應(yīng)激在T2DM發(fā)生發(fā)展中的作用有了進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)；楤木總皂苷能改善T2DM大鼠的氧化損傷并具有一定的降糖作用，其對(duì)T2DM的治療作用還需進(jìn)一步探討；從楤木總皂苷中分離出的化合物TA35在體外具有很強(qiáng)的抗糖基化和刺激胰島βTC3細(xì)胞釋放胰島素的作用。通過(guò)本課題的研究，對(duì)氧化應(yīng)激在T2DM發(fā)生發(fā)展中的作用有了更深