1、目的：傳統(tǒng)抗生素的毒副作用及其耐藥菌株的出現(xiàn)，迫使人們尋找新型的抗微生物制劑?？咕模ˋntibacterial peptide，ABP）是由動(dòng)物、植物、昆蟲(chóng)以及人體基因組編碼的具有抗生素樣活性的肽類(lèi)物質(zhì)。它是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要成分，構(gòu)成宿主防御病原微生物入侵的第一道屏障。抗菌肽除了具有分子量小、熱穩(wěn)定性好、免疫原性較低等特點(diǎn)，還由于其獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)，能有效抑殺真菌、病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)，而不易產(chǎn)生耐藥性，能選擇性殺滅腫瘤細(xì)胞，而對(duì)人畜毒

2、副作用極小。因此，抗菌肽作為新藥開(kāi)發(fā)，具有廣闊的前景?；紫x(chóng)是寄生于動(dòng)物和人體內(nèi)的線蟲(chóng)，從其體內(nèi)分離到的抗菌肽Ceeropin P1顯示有廣譜的殺菌作用。本研究以蛔蟲(chóng)抗菌肽Cecropin P1為研究對(duì)象，利用基因工程的方法制備蛔蟲(chóng)抗菌肽，并進(jìn)行了體外抗菌活性測(cè)定，為進(jìn)一步研究其抗菌機(jī)理及應(yīng)用研究打下基礎(chǔ)。 方法：根據(jù)蛔蟲(chóng)抗菌肽CecropinP1基因序列和氨基酸序列，以及大腸埃希菌對(duì)編碼同種氨基酸不同密碼子的偏嗜性，對(duì)蛔蟲(chóng)抗菌肽

3、CecropinP1編碼基因進(jìn)行改造，人工設(shè)計(jì)并合成了3條抗菌肽CecropinP1基因寡核苷酸片段，通過(guò)PCR擴(kuò)增得到抗菌肽CecropinP1基因，將此基因克隆到原核表達(dá)載體pET30a中，然后將重組質(zhì)粒pET30a-CecropinP1轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，含有正確重組質(zhì)粒的陽(yáng)性菌株經(jīng)IPTG誘導(dǎo)進(jìn)行表達(dá)，SDS-APGE電泳觀察表達(dá)產(chǎn)物，瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物體外抑菌活性。 結(jié)果酶切分析、DNA測(cè)序等證實(shí)Cecropin

4、 P1基因已被正確地插入pET30a中；重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-CecropinP1在大腸桿菌BL21中成功地表達(dá)了CecropinP1蛋白；重組蛋白具有一定的抗菌活性。 結(jié)論成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMD-18T-CecropinP1與pET-30a-CecropinP1，并在大腸埃希菌BL21（DE3）中以包涵體形式高效表達(dá)，并檢測(cè)到CecropinP1對(duì)部分病原菌的抗菌作用，為進(jìn)一步研究蛔蟲(chóng)抗菌肽CecropinP1奠定了基礎(chǔ)