1、目的：探索長片段非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）調(diào)控的NF-κB信號通路在小鼠異基因骨髓移植后肝靜脈閉塞病(hepatic veno-occlusive disease，HVOD)中的作用。
　　方法：8～10周齡雄性BALB/c（H-2d）小鼠經(jīng)致死劑量全身照射(total bodyirradiation，TBI)預(yù)處理后隨機(jī)分為異基因骨髓移植組（BMT組）、骨髓聯(lián)合內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothe

2、lial progenitor cell，EPC)移植組（EPC組）和單純照射組（TBI組）另設(shè)正常對照組。移植后7、15、33天檢測移植后受鼠肝功能，HE染色及Masson染色觀察肝細(xì)胞損傷、修復(fù)和纖維化情況。分離肝細(xì)胞，熒光定量PCR及Western blot檢測肝細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞修復(fù)及纖維化相關(guān)分子的mRNA及蛋白水平變化及NF-κB信號通路的活化，并檢測血清TNF-α及IL-6水平。進(jìn)行基因芯片分析，篩選出與NF-κB信號通路相關(guān)的l

3、ncRNAs，并對其功能進(jìn)行初步驗(yàn)證。
　　結(jié)果：1.骨髓移植及EPC聯(lián)合移植可改善移植受鼠肝功能:移植后BMT組小鼠血清ALT, AST及膽紅素水平持續(xù)下降，EPC組小鼠ALT水平呈增高趨勢，AST水平呈下降趨勢，膽紅素水平持續(xù)下降，移植后早期，EPC組與比BMT組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。肝組織病理染色結(jié)果顯示，移植組小鼠肝細(xì)胞損傷于移植后逐漸減輕，第15天，BMT組肝細(xì)胞壞死、水腫嚴(yán)重，EPC組肝損傷比BMT組

4、輕，兩組小鼠同時出現(xiàn)肝纖維化。第33天兩移植組小鼠肝細(xì)胞無水腫、壞死，但肝纖維化加重;移植后第15天EPC組與BMT組相比cyclinD1及cyclinE1的表達(dá)也顯著增高，趨化因子CCL2、CXCL2、CXCR4及TGFβ1等的表達(dá)持續(xù)增高，移植后第33天EPC組比BMT組降低（P＜0.05）。2、NF-κB信號通路的活化:移植后EPC組TNF-α水平呈下降趨勢，BMT組持續(xù)增高，第7天EPC組比BMT組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

5、.05)，隨后兩組小鼠間無差別。IL-6水平在BMT組內(nèi)持續(xù)下降，EPC組于移植后第15天達(dá)高峰，第7天EPC組比BMT組降低，第15天比BMT組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。移植后小鼠肝細(xì)胞內(nèi)NF-κB信號通路相關(guān)分子IKKβ于移植后第15天達(dá)高峰，EPC組比BMT組增高(P＜0.05)，移植后33天持續(xù)較高，兩組間無差別。IKKβ的活化、IκBα的磷酸化及P65的活化水平與IKKβ的表達(dá)水平一致;肝細(xì)胞內(nèi)與NF-κ B信號

6、通路相關(guān)的lncRNAs有6種，其中AK040047、uc009ldv.1、ENSMUST00000121499與其靶基因的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.837、0.822、0.691，P＜0.05)，uc008ymw.1與其靶基因的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.692，P＜0.05），AK052949、AK004294與其靶基因的表達(dá)無顯著相關(guān)關(guān)系(r=0.33，0.284，P＞0.05)。在這些lncRNAs中， uc009ldv.1、 uc