1、NF-κB作為B細胞中κB輕鏈表達的調控元件，其家族的功能和調控是20年來研究的熱點。免疫系統(tǒng)識別抗原并通過NF-κB傳遞信息，由NF-κB失調引發(fā)的疾病等相關研究進展，使得這個可誘導轉錄因子受到了越來越廣泛的關注。大量的研究工作使得NF-κB途徑成為了解的較為透徹的信號通路，并被廣泛應用于其他研究系統(tǒng)；而NF-κB本身也成為不同領域研究思想的融合點?？烧T導的基因表達調控是正常生理的核心元素，也是多細胞有機體適應環(huán)境及機械、化學和微生物

2、脅迫能力的關鍵。由于其可研究性和對疾病的重要性，NF-κB途徑成為可誘導轉錄因子協(xié)調產生的細胞、組織及有機體水平應答的模型。
　　QKI是一種RNA結合蛋白，對其功能認識尚不深入。組織特異性表達降低QKI導致神經髓鞘發(fā)育障礙，ENU誘導QKI純合突變的小鼠出現(xiàn)胚胎致死。目前對QKI的研究大多集中在神經系統(tǒng)中，它參與少突膠質細胞的分化而影響神經髓鞘的形成。深入的機制探討發(fā)現(xiàn)QKI結合MBP、MAG等髓鞘發(fā)育重要分子的3’UTR，改變

3、mRNA的定位和穩(wěn)定性，從而改變其蛋白表達水平參與髓鞘的形成。
　　從分子生物學的角度更深入地了解一個蛋白質的功能，首先可以從其受到的調節(jié)機制入手。通過生物信息學分析，我們發(fā)現(xiàn)在QKI的啟動子區(qū)域，ATG上游的710bp處存在一個非常保守的NF-κB的結合位點，推測NF-κB信號通路對QKI具有調控作用。為了證實這一調控作用的存在，我們首先構建了包含QKI基因啟動子區(qū)域，atg上游2056個堿基的熒光素酶載體。通過熒光素酶報告系統(tǒng)

4、的分析，發(fā)現(xiàn)NF-κB信號通路的活性亞基P65和外源活化因子TNF-α可以下調QKI啟動子的轉錄活性，提示我們NF-κB下調QKI的轉錄。通過半定量RT-PCR檢測TNF-α刺激C2C12和原代培養(yǎng)的新生大鼠的骨骼肌細胞后QKI的mRNA的表達變化，得到TNF-α的刺激可以在轉錄水平下調QKI的表達。為了進一步說明TNF-α的刺激是通過NF-κB信號通路發(fā)揮轉錄下調QKI的功能以及確認NF-κB信號通路對QKI的轉錄下調，我們采用TNF

5、-α活化NF-κB通路特異性的抑制劑BAY11-7082以及干預NF-κB通路中重要分子的方式，證明了NF-κB確實對QKI具有轉錄下調的功能。之后，通過CHIP試驗證明了NF-κB信號通路中的活化亞基P65可以與QKI的啟動子區(qū)域直接的結合，而其發(fā)揮轉錄抑制的機制可能與HDACs的相互作用有關。
　　為了研究NF-κB對QKI下調在骨骼肌中的功能，我們首先探討了QKI在C2C12細胞中的功能。通過干預QKI的表達，我們發(fā)現(xiàn)QKI

6、既有抑制C2C12細胞增殖的功能又有抑制C2C12細胞分化的功能。由于在C2C12細胞中過表達QKI后reserve細胞的marker分子P130的明顯上升，說明上述QKI對肌肉細胞產生的影響是通過促進reserve細胞的形成實現(xiàn)的。在我們誘導C2C12分化后，我們通過分步消化法得到reserve細胞，發(fā)現(xiàn)其中QKI的表達豐度高于分化成熟的myotube。由于reserve細胞與成體肌肉干細胞的特性非常相似，所以我們認為NF-κB信號通