半枝蓮多糖的提取分離純化、表征鑒定及抗氧化活性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、半枝蓮是唇形科黃芩屬多年生草本植物,在我國具有悠久的藥用歷史。為了加強對半枝蓮的綜合利用,本研究以中草藥半枝蓮(半枝蓮地上部分)為研究對象,對半枝蓮多糖的提取、純化、檢測及抗氧化活性進(jìn)行研究。通過單因素實驗和正交試驗考察了溫度、時間、料液比等因素對多糖提取率的影響。利用葡聚糖凝膠和離子交換層析分離技術(shù)對多糖進(jìn)行純化,經(jīng)快速層析純化系統(tǒng)(FPLC)和聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定純度,運用質(zhì)譜考察了其單糖組成,采用體外化學(xué)模擬和體內(nèi)實驗對多糖的抗

2、氧化活性進(jìn)行了探討,試驗結(jié)果如下: 1.優(yōu)化了半枝蓮粗多糖提取工藝參數(shù),得到水提最佳浸提參數(shù)為:溫度 70℃,時間6h,料液比1:30,浸提1次,多糖得率為2.703%。 2.半枝蓮粗多糖經(jīng)DEAE-Cellulose-52 和Sepharose 4B純化,獲得了兩個組分SBP<,w>和 SBP<,s>,其紅外光譜均在 3420(O-H)、2940(C-H)、1665(C=O)、1445(c-o)、1120(c-o)cm

3、<,-1>等處有多糖的特征吸收峰,并且二者在877cm<,-1>處均有吸收峰,表明存在吡喃糖苷鍵。 3.苯酚-硫酸法測定了SBP<,w>和SBP<,s>的多糖含量分別為 89.60%和92.57%;間羥聯(lián)苯法測定糖醛酸含量分別為4.9%和19.6%。采用快速層析純化系統(tǒng)(FPLC)和聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定SBP<,s>為均一組分,并測定其相對分子質(zhì)量為1.1×10<,4>Da;利用 GC-MS 分析其單糖組成為:鼠李

4、糖、巖藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩爾比依次為1.00:0.13:0.80:0.1.0:0.34:0.56:3.04。 4.通過化學(xué)模擬和對小鼠組織和體液的體外實驗,研究了SBP<,w>和 SBP<,s>的體外抗氧化活性。采用鄰苯三酚法及 Fenton 體系測定 SBP<,w> 和 SBP<,s> 對O<,2>·和·OH的清除作用,SBP<,w>的半數(shù)清除濃度 IC<,5o-SBP<,w>> 分別為 921.7

5、3 μg/mL 和 89.26μg/mL;SBP<,s>的半數(shù)清除濃度IC<,5o-SBP<,w>>分別為800.00μg/mL和90.42μg/mL。實驗結(jié)果表明,SBP<,w>和SBP<,s>具有很強的清除O<,2>·和·OH生成的活性,對各種活性氧均具有抗氧化作用,具有直接清除自由基和脂質(zhì)過氧化的活性,可抑制小鼠肝組織的脂質(zhì)過氧化,對Fe<'2+>和 H<,2>O<,2> 誘導(dǎo)的肝組織過氧化物損傷具有保護(hù)作用,能減少紅細(xì)胞溶血的發(fā)

6、生。 5.半枝蓮多糖SBP<,w>和SBP<,s>按劑量小鼠腹腔注射,qd,連續(xù)35d,以分光光度法測定小鼠血清、肝組織中的超氧化物岐化酶(SOD)活力以及過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量。結(jié)果顯示SBP<,w>和SBP<,s>能劑量依賴性提高小鼠血清、肝組織中的SOD活力,并可劑量依賴性降低小鼠血清、肝組織中MDA的水平。SBP<,w>和SBP<,s>表現(xiàn)出較好的抗氧化作用,提示其在維系體內(nèi)自由基代謝平衡、延緩衰老方面具有一定

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