1、山東大學碩士學位論文SPKS1P信號途徑對人肝癌細胞增殖、凋亡及VEGF表達的作用姓名：姜大磊申請學位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學（消化系?。┲笇Ы處煟焊咂G景20070512山東人學碩十學位論文sPK／s1P信號途徑對人肝癌細胞增殖、凋亡及VEGF表達的作用碩士研究生：專業(yè)：姜大磊消化內(nèi)科學高艷景副教授中文摘要目的：1一磷酸鞘氨醇(sphingosine一卜phospate。SlP)、鞘氨醇激酶(sphingosinekinase，SPK)均

2、是細胞增殖及存活的重要信號分子，SlP由SPK磷酸化鞘氨醇(sphingosine，Sp)而成，已經(jīng)證實sPK／slP信號途徑在某些惡十牛腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，但對其具體作用機制尚未明確。肝癌為富含血管的腫瘤，血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)在肝癌中有高表達，對肝癌的生長和轉移有重要意義“1。SPK／S1P信號途徑是否具有調(diào)節(jié)VEGF表達的作用目前國內(nèi)外均未見報道。本課

3、題應用細胞生物學、分子生物學等方法研究了SPK／s1P信號途徑對人肝癌細胞HepG2增殖、凋亡以及對VEGF的影響與作用機制。方法：人肝癌細胞株HepG2培養(yǎng)在含lo％新生牛血清的DM陰培養(yǎng)基中，置于5％c02、飽和濕度、37℃培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)，O25％胰蛋白酶消化，倒置顯微鏡觀察細胞生長狀況。采用對數(shù)生長期的細胞進行實驗。觀察5～20帥oL／L濃度范圍DMS(Dimethylsphingosine，鞘氨醇激酶的特異性抑制劑，N，N’一

4、二甲基鞘氨醇)對HepG2細胞增殖、調(diào)亡及分泌VEGF的影響。MTT法(四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法)檢測細胞的存活率，倒置相差顯微鏡及掃描電鏡觀察調(diào)亡細胞形態(tài)學寥芝化，TUNEL(Terminaldeoxynucleotidemediatednickendlabeling)法檢測細胞的凋亡，雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme—linkedi腫unosorbentassay，ELISA)法檢測對肝癌細胞分泌VEGF的影響，RT—PC